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求助 ORF质粒扩增双酶切后 DNA跑胶条带略大于目的条带大小
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各位大侠，origene购买的wee1 ORFclone 质粒，转化DH5后，QIAprep mini kit 提质粒，浓度在200ng/ul，A280/260 1.90， A260/230 2.26， Mlu1和Sgf1双酶切后产物跑胶（1% Agrose），目的ORF 1942bp，整个质粒8.6Kb，跑胶电压120V， SYBR-Safe染色，跑完胶，切出来的条带在2Kb-2.5Kb之间，比理论的要大一些。 各位大侠问题：1、为什么目的条带都略大于理论大小？2、为什么条带浓度比较浅酶切效果不好么？3为什么没有空载体部分的条带？胶孔好像显影很明显，有坛子里高手说是因为用mini kit提后蛋白污染了，而且蛋白污染会让目的片段迁移减慢，不过以前没有出现过这种情况啊。多谢各位高手帮忙！ 说明Lane1、6为marker DNAladder 第一个亮条带是3Kb，下面依次是2.5Kb，2Kb，1.5Kb，Lane2、3、4、5是不同的单克隆扩增产物，应该都是一样的。  39459090507005920.jpg  wxid_befss7hmn9hi21_1482074708598_5.png  wxid_befss7hmn9hi21_1482075552639_88.png |
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