| 查看: 2325 | 回复: 0 | ||
[求助]
求助 ORF质粒扩增双酶切后 DNA跑胶条带略大于目的条带大小
|
|
各位大侠，origene购买的wee1 ORFclone 质粒，转化DH5后，QIAprep mini kit 提质粒，浓度在200ng/ul，A280/260 1.90， A260/230 2.26， Mlu1和Sgf1双酶切后产物跑胶（1% Agrose），目的ORF 1942bp，整个质粒8.6Kb，跑胶电压120V， SYBR-Safe染色，跑完胶，切出来的条带在2Kb-2.5Kb之间，比理论的要大一些。 各位大侠问题：1、为什么目的条带都略大于理论大小？2、为什么条带浓度比较浅酶切效果不好么？3为什么没有空载体部分的条带？胶孔好像显影很明显，有坛子里高手说是因为用mini kit提后蛋白污染了，而且蛋白污染会让目的片段迁移减慢，不过以前没有出现过这种情况啊。多谢各位高手帮忙！ 说明Lane1、6为marker DNAladder 第一个亮条带是3Kb，下面依次是2.5Kb，2Kb，1.5Kb，Lane2、3、4、5是不同的单克隆扩增产物，应该都是一样的。  39459090507005920.jpg  wxid_befss7hmn9hi21_1482074708598_5.png  wxid_befss7hmn9hi21_1482075552639_88.png |
回复此楼» 猜你喜欢
PRMT5·MTA 抑制剂 MRTX1719 的科研应用
已经有0人回复
-
SW033291 科研使用解析：分子特征、储存与实验获取要点
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有108人回复
-
泛 RAS 抑制新思路：大环肽拟似物如何同时牵住突变型与野生型 RAS？
已经有0人回复
-
TYK2/JAK1 双靶点工具化合物 Brepocitinib：激酶选择性、研究进展与实验应用全解析
已经有0人回复
-
矢车菊素-3-O-葡萄糖苷质控实录：从一张HPLC图谱读懂纯度与稳定性
已经有0人回复
-
恩诺沙星（Enrofloxacin）科研解析：分子特征、LC-MS/MS 检测与实验室使用要点
已经有0人回复
-
Calderasib理化性质与实验操作技术笔记
已经有0人回复
-
RMC-6291怎么用？RAS(ON) 三重复合物工具化合物的实验室实操要点
已经有0人回复
-
苯并呋咱全解析：NBD 荧光衍生化试剂母核的化学特性与实验室应用
已经有0人回复
-
生物质炭与活化剂氢氧化钾混合注意事项
已经有0人回复
200
