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mochenmi

铜虫 (小有名气)

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[求助] qPCR扩增效率问题已有1人参与

之前查阅资料了解到要使用2-（deta,deta）Ct值分析方法，必须使目的基因与内参基因扩增效率一致。
因此采用cDNA梯度稀释法绘制标准曲线计算扩增效率。我有10个目的基因和1个内参，得到的结果从130%到190%不等，R方均大于0.99。
想问一下：1. 扩增效率这么高怎么办？
2. 另外扩增效率不一致的话，是不是只能用双标准曲线分析方法了？可是我有10个目的基因，只能一个一个弄嘛？急~

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1楼 2016-12-11 23:42:57

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浮笙若梦

铁虫 (初入文坛)

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【答案】应助回帖

等比稀释比较好，而且稀释比例小的话分辨率会不好，体系中存在抑制物会使扩增效率偏大，当然试剂、你的混样方式等也是有影响的

17楼2016-12-26 15:43:46

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mochenmi

铜虫 (小有名气)

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请各位高手解答…

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2楼2016-12-11 23:43:50

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许彦

木虫 (正式写手)

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是不是没有稀释好。

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3楼2016-12-12 15:06:49

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mochenmi

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引用回帖:

3楼: Originally posted by 许彦 at 2016-12-12 15:06:49
是不是没有稀释好。

我是按照反转录盒最大量反转录的（5ug），然后从10倍稀释到了500倍。5个稀释倍数做的标准曲线。

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4楼2016-12-12 16:49:24

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