| 查看: 2344 | 回复: 12 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
双酶切连接转化平板长很多，但都是假阳性
|
|||
|
最近1个月做实验，每次构建表达载体平板上都是长很多单克隆，但送测后不是载体自连就是无信号。是载体没有完全切开？还是抗生素的问题？还是连接？ 用赛默飞的快切酶，一般切40分钟左右。用的酶切位点也是平时常用的。以前用同样的酶切20分钟都没什么问题 发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有68人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有15人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
原海亮
木虫 (著名写手)
- 应助: 232 (大学生)
- 金币: 4607.4
- 散金: 3521
- 红花: 33
- 帖子: 1804
- 在线: 375.4小时
- 虫号: 1392705
- 注册: 2011-09-06
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
11楼2016-12-10 22:00:11
sky蒲公英
版主 (文坛精英)
- 应助: 177 (高中生)
- 贵宾: 15.664
- 金币: 119295
- 散金: 13465
- 红花: 300
- 沙发: 1428
- 帖子: 19480
- 在线: 5618.4小时
- 虫号: 3384889
- 注册: 2014-08-27
- 性别: GG
- 专业: 免疫生物学
- 管辖: 文献求助
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-12-10 09:02:35
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-12-10 09:02:35
|
我也在做这个，酶切的话载体最好过夜，尽可能的酶切完全。还有转化的时候可以做个对照 发自小木虫Android客户端 |
2楼2016-12-09 23:14:35
mochenmi
铜虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1504.3
- 散金: 29
- 帖子: 221
- 在线: 48.7小时
- 虫号: 1966704
- 注册: 2012-09-01
- 专业: 植物病理学
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-12-10 09:02:19
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-12-10 09:02:19
|
仔细再分析下酶切位点和切完后的片段大小，看是不是把载体切坏了。连接转化一般不会出问题的，刚做实验的新手也能成功。 发自小木虫IOS客户端 |
3楼2016-12-09 23:50:07
4楼2016-12-10 00:14:37
5