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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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wy604987664

新虫 (小有名气)

[交流] 双酶切连接转化平板长很多,但都是假阳性

最近1个月做实验,每次构建表达载体平板上都是长很多单克隆,但送测后不是载体自连就是无信号。是载体没有完全切开?还是抗生素的问题?还是连接?
用赛默飞的快切酶,一般切40分钟左右。用的酶切位点也是平时常用的。以前用同样的酶切20分钟都没什么问题

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原海亮

木虫 (著名写手)


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测序前不需要做个pcr或者酶切验证一下么

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天空才是极限,我有信心飞的更高!
11楼2016-12-10 22:00:11
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sky蒲公英

版主 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

★ ★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-12-10 09:02:35
我也在做这个,酶切的话载体最好过夜,尽可能的酶切完全。还有转化的时候可以做个对照

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知识就像蒲公英的花儿一样,播种在世界的每一个角落。
2楼2016-12-09 23:14:35
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mochenmi

铜虫 (小有名气)

★ ★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-12-10 09:02:19
仔细再分析下酶切位点和切完后的片段大小,看是不是把载体切坏了。连接转化一般不会出问题的,刚做实验的新手也能成功。

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3楼2016-12-09 23:50:07
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小蘑菇cc

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by mochenmi at 2016-12-09 23:50:07
仔细再分析下酶切位点和切完后的片段大小,看是不是把载体切坏了。连接转化一般不会出问题的,刚做实验的新手也能成功。

最近做实验也有楼主遇到的问题 请问什么叫把载体切坏 是酶切时间过长嘛?

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4楼2016-12-10 00:14:37
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