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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 双酶切连接转化平板长很多，但都是假阳性
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wy604987664

新虫 (小有名气)

[交流] 双酶切连接转化平板长很多，但都是假阳性

最近1个月做实验，每次构建表达载体平板上都是长很多单克隆，但送测后不是载体自连就是无信号。是载体没有完全切开？还是抗生素的问题？还是连接？
用赛默飞的快切酶，一般切40分钟左右。用的酶切位点也是平时常用的。以前用同样的酶切20分钟都没什么问题

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1楼 2016-12-09 18:02:14
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原海亮

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
测序前不需要做个pcr或者酶切验证一下么

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天空才是极限，我有信心飞的更高！
11楼2016-12-10 22:00:11
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sky蒲公英

版主 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-12-10 09:02:35
我也在做这个，酶切的话载体最好过夜，尽可能的酶切完全。还有转化的时候可以做个对照

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知识就像蒲公英的花儿一样，播种在世界的每一个角落。
2楼2016-12-09 23:14:35
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mochenmi

铜虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-12-10 09:02:19
仔细再分析下酶切位点和切完后的片段大小，看是不是把载体切坏了。连接转化一般不会出问题的，刚做实验的新手也能成功。

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3楼2016-12-09 23:50:07
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小蘑菇cc

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by mochenmi at 2016-12-09 23:50:07
仔细再分析下酶切位点和切完后的片段大小，看是不是把载体切坏了。连接转化一般不会出问题的，刚做实验的新手也能成功。

最近做实验也有楼主遇到的问题 请问什么叫把载体切坏 是酶切时间过长嘛？

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4楼2016-12-10 00:14:37
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