| 查看: 17204 | 回复: 6 | |||
[交流]
菜鸡入门~请问荧光定量PCR如何根据CT值计算基因表达量做出图表~在线等~急 已有4人参与
|
|
小弟刚开始做QRT-PCR的实验，很多东西不懂，想请教一下大神们。 我现在是在用荧光定量筛选基因，没有处理组，样品就是最原始的植物。现在荧光定量跑完了，要做出图表来，如何根据目的基因和内参的CT值，计算目的基因的表达量呢？我看了很多△△ct的方法，那些似乎都是计算处理组和对照组之间的相对表达量，那么我这个没有处理组，应该如何计算呢？ 不知道我说清楚没有。举个例子 目的 22 内参 18 △CT=22-18=4 我只有这些，那么接下来怎么分析数据做图表呢？ 因为我有几十个基因，就是比较几十个基因的表达量，看哪个高哪个低，样品是单一的。 在线等~急求指教  |
回复此楼» 猜你喜欢
TYK2/JAK1 双靶点工具化合物 Brepocitinib：激酶选择性、研究进展与实验应用全解析
已经有0人回复
-
矢车菊素-3-O-葡萄糖苷质控实录：从一张HPLC图谱读懂纯度与稳定性
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有157人回复
-
恩诺沙星（Enrofloxacin）科研解析：分子特征、LC-MS/MS 检测与实验室使用要点
已经有0人回复
-
Calderasib理化性质与实验操作技术笔记
已经有0人回复
-
RMC-6291怎么用？RAS(ON) 三重复合物工具化合物的实验室实操要点
已经有0人回复
-
苯并呋咱全解析：NBD 荧光衍生化试剂母核的化学特性与实验室应用
已经有0人回复
-
生物质炭与活化剂氢氧化钾混合注意事项
已经有0人回复
-
科研人必读：新一代 KRAS G12C 抑制剂 Olomorasib 的研究进展
已经有0人回复
-
BT-11（Omilancor）研究化合物全解析：从分子结构到实验应用要点
已经有0人回复
-
富马酸贝达喹啉：二芳基喹啉类工具化合物的化学特征
已经有0人回复
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
相对定量不同基因不能比较吧。引物设计好坏都会影响扩增结果，就是你同样一个基因序列，设计出多个引物去做qpcr的结果都会不一样。。或者你去做绝对定量看看，利用标准品做标准曲线应该就可以了 发自小木虫Android客户端 |
2楼2016-12-05 13:36:46
月夜鸣鸣
铜虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 933.8
- 散金: 47
- 帖子: 38
- 在线: 19.7小时
- 虫号: 1883451
- 注册: 2012-07-08
- 性别: GG
- 专业: 兽医寄生虫学
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
将其中一个基因的表达量作为参照就可以了，最好是同一批做下来，分批做也可以，但每次都要把该基因作为参照，而且每次该基因的ct值不能有太大出入，这样就可以比较不同基因表达量了 发自小木虫Android客户端 |
3楼2016-12-05 13:48:11
4楼2016-12-05 15:53:52
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
我觉得是不能比的，你根本不能说明某个基因的Ct值很大是实际上这个基因的表达量本来就很少，还是因为由于你对这个基因的引物设计不好，或者没有选择该基因的最优温度来做，又或者是这一次仪器对荧光信号的吸收程度不一样导致的。等等。。然后如果做绝对定量的话，估计你就得重新去做了。 发自小木虫Android客户端 |
5楼2016-12-05 18:24:53
6楼2016-12-08 19:50:30
硫酸童
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2585.4
- 散金: 88
- 红花: 2
- 帖子: 65
- 在线: 90.1小时
- 虫号: 5095823
- 注册: 2016-10-08
- 性别: MM
- 专业: 神经生物学
7楼2016-12-08 23:17:03