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菜鸡入门~请问荧光定量PCR如何根据CT值计算基因表达量做出图表~在线等~急 已有4人参与
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小弟刚开始做QRT-PCR的实验，很多东西不懂，想请教一下大神们。 我现在是在用荧光定量筛选基因，没有处理组，样品就是最原始的植物。现在荧光定量跑完了，要做出图表来，如何根据目的基因和内参的CT值，计算目的基因的表达量呢？我看了很多△△ct的方法，那些似乎都是计算处理组和对照组之间的相对表达量，那么我这个没有处理组，应该如何计算呢？ 不知道我说清楚没有。举个例子 目的 22 内参 18 △CT=22-18=4 我只有这些，那么接下来怎么分析数据做图表呢？ 因为我有几十个基因，就是比较几十个基因的表达量，看哪个高哪个低，样品是单一的。 在线等~急求指教  |
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相对定量不同基因不能比较吧。引物设计好坏都会影响扩增结果，就是你同样一个基因序列，设计出多个引物去做qpcr的结果都会不一样。。或者你去做绝对定量看看，利用标准品做标准曲线应该就可以了 发自小木虫Android客户端 |
2楼2016-12-05 13:36:46
月夜鸣鸣
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将其中一个基因的表达量作为参照就可以了，最好是同一批做下来，分批做也可以，但每次都要把该基因作为参照，而且每次该基因的ct值不能有太大出入，这样就可以比较不同基因表达量了 发自小木虫Android客户端 |
3楼2016-12-05 13:48:11
4楼2016-12-05 15:53:52
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我觉得是不能比的，你根本不能说明某个基因的Ct值很大是实际上这个基因的表达量本来就很少，还是因为由于你对这个基因的引物设计不好，或者没有选择该基因的最优温度来做，又或者是这一次仪器对荧光信号的吸收程度不一样导致的。等等。。然后如果做绝对定量的话，估计你就得重新去做了。 发自小木虫Android客户端 |
5楼2016-12-05 18:24:53
6楼2016-12-08 19:50:30
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7楼2016-12-08 23:17:03