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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 请教一下原核生物基因串联表达的问题
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雷阵雨YZX

新虫 (初入文坛)

[交流] 请教一下原核生物基因串联表达的问题 已有5人参与

我想以多顺反子的形式在大肠杆菌里用质粒共表达两个基因，然而第一个基因正常表达，第二个基因却表达不出来（蛋白胶上没带）。我设计时在两个基因中间加了20个bp的间隔区，其中7~12bp的位置是一段SD序列。请问问题出在哪里呢？是间隔区太短还是出了移码的问题？
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1楼 2016-12-03 15:14:17
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13424058101

新虫 (初入文坛)
★
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你间隔区的序列是怎么设计的？用的是什么表达质粒
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2楼2016-12-14 10:43:40
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雷阵雨YZX

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 13424058101 at 2016-12-14 10:43:40
你间隔区的序列是怎么设计的？用的是什么表达质粒

质粒是普通的pet26b。第一个基因后面是一个限制酶位点，紧接着一段6bp的sd序列（和质粒上一样），后面跟第二个基因隔了一段6bp的间隔区（就是基因组中第二个基因上游6bp的片段）。

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3楼2016-12-15 09:19:40
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)
★
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你是要两个蛋白串起来吗？如果是中间设计好连接桥就可以了，无需SD序列。如果是要两个蛋白共表达，建议你用pETDuet载体试试，该载体有两个多克隆位点

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4楼2016-12-15 09:48:23
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wshyxd

新虫 (初入文坛)
★
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为什么要加间隔序列呢
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5楼2016-12-26 19:51:06
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13424058101

新虫 (初入文坛)
★
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最近老板让做单基因的串联表达，目的就是为了提高小肽分子的表达量，我选择用多顺反子串联表达，可是原理不太清楚，查英文文献没能找到单基因串联表达的文章，大多是双顺反子表达系统。多顺反子表达系统中我对顺反子间的间隔序列是否会形成二级结构存在疑惑，如果顺反子间存在二级结构就会抑制翻译，目的蛋白就得不到高效表达。请问，有没有童鞋是做这方面研究的，给予指导交流。
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6楼2016-12-29 18:07:47
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wangsongwei

木虫 (小有名气)
★
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遇到相同个问题，楼主可否加个好友？q：123387882
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7楼2017-04-18 14:04:26
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Whatsssup

新虫 (初入文坛)
★
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引用回帖:
4楼: Originally posted by ganchao1776 at 2016-12-15 09:48:23
你是要两个蛋白串起来吗？如果是中间设计好连接桥就可以了，无需SD序列。如果是要两个蛋白共表达，建议你用pETDuet载体试试，该载体有两个多克隆位点

大神，连接桥的设计有什么讲究吗？

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8楼2018-01-23 15:48:58
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