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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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雷阵雨YZX

新虫 (初入文坛)

[交流] 请教一下原核生物基因串联表达的问题 已有5人参与

我想以多顺反子的形式在大肠杆菌里用质粒共表达两个基因,然而第一个基因正常表达,第二个基因却表达不出来(蛋白胶上没带)。我设计时在两个基因中间加了20个bp的间隔区,其中7~12bp的位置是一段SD序列。请问问题出在哪里呢?是间隔区太短还是出了移码的问题?
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你是要两个蛋白串起来吗?如果是中间设计好连接桥就可以了,无需SD序列。如果是要两个蛋白共表达,建议你用pETDuet载体试试,该载体有两个多克隆位点

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4楼2016-12-15 09:48:23
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13424058101

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你间隔区的序列是怎么设计的?用的是什么表达质粒
2楼2016-12-14 10:43:40
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雷阵雨YZX

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 13424058101 at 2016-12-14 10:43:40
你间隔区的序列是怎么设计的?用的是什么表达质粒

质粒是普通的pet26b。第一个基因后面是一个限制酶位点,紧接着一段6bp的sd序列(和质粒上一样),后面跟第二个基因隔了一段6bp的间隔区(就是基因组中第二个基因上游6bp的片段)。

发自小木虫Android客户端
3楼2016-12-15 09:19:40
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wshyxd

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
为什么要加间隔序列呢
5楼2016-12-26 19:51:06
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