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upgo123

金虫 (小有名气)

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专业: 教育学

[求助] PCR扩增之前能扩出来，现在同样条件也扩不出来了已有2人参与

如题，我用的
dntp~~200uM
模板量小于100ng,
酶量1.5U,
引物0.5uM,
DMSO~~4%,
反应体系20ul。
为什么会出现图中那种结果呢？

@biostar2009 [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

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选择，然后坚持

1楼 2016-12-01 00:35:23

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Alice 2016

铁虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

突然觉得非特异性扩增好常见呀，你可以从以下几个方面做一下尝试：
原因
1. 引物特异性差
2. 引物或模板浓度太高
3. 酶或镁离子浓度偏高
4. 退火温度偏低
5. 循环次数太多
对策
1. 重新设计引物或使用巣式PCR
2. 适当降低引物和模板浓度
3. 适当降低酶量或镁离子浓度
4. 提高退火温度
5. 适当降低循环次数