应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » [求助] 溶菌酶破碎大肠杆菌
111/2返回列表12下一页
查看: 2115  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

humants

金虫 (正式写手)

[交流] [求助] 溶菌酶破碎大肠杆菌

我打算做蛋白提取，以前单纯用超声效果不好，为了尽量保留活性，选择用溶菌酶见超声破碎的方法。
  我按照分子克隆上的步骤：
  1.菌体称重为0.4g，加PBS buffer 3ml （PH=8.05），充分混匀。
  2.加现配的50mg/ml溶菌酶溶液240微升，至终浓度4mg/ml。冰水浴3小时。
  3.超声400w，10s，10s，40次，结果目测还是乳白色，镜检很多菌体。

为什么破不开，搞不懂，我前几天做预实验的时候，还能变澄清？？？
注：预实验的步骤与现在的一样，只是菌体重量是0.1g加PBS 3ml，再加溶菌酶至1mg/ml，超声400w，10s,10s, 20次。

麻烦大家能给以帮助，先谢谢了...

今天又做了一次，加完溶菌酶之后在4度中半小时，产生了乳白色絮状沉淀，还以为破碎好了呢，但是一超又变混了，1200rpm ，15min 离心之后沉淀发黄，和菌体差不多应该是没破开...？？？？

[ Last edited by humants on 2008-12-6 at 18:45 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2008-12-04 08:49:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

小小7093

★
humants(金币+1,VIP+0):谢谢你的帮助，这么久才评分不好意思，
菌体浓度过高，不利于破碎，可以试试：反复冻融
赞一下(2人) 回复此楼
10楼2008-12-06 12:43:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

swordhang

金虫 (小有名气)
冰置3小时？
回复此楼
2楼2008-12-04 12:33:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

humants

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by swordhang at 2008-12-4 12:33:
冰置3小时？

写错了是冰水浴...
赞一下 回复此楼
3楼2008-12-04 18:51:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hxsj

木虫 (正式写手)
你的蛋白是上清表达还是包涵体？
我觉得可能超声时间不够
赞一下 回复此楼
4楼2008-12-04 23:26:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

humants

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by hxsj at 2008-12-4 23:26:
你的蛋白是上清表达还是包涵体？
我觉得可能超声时间不够

跑过电泳，大部分是包涵体，所以打算用PBS破碎然后洗涤包涵体...
赞一下 回复此楼
5楼2008-12-05 08:17:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wusongabel

银虫 (小有名气)
试试37度温浴班小时再冰水浴半小时
赞一下 回复此楼
6楼2008-12-05 10:01:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hxsj

木虫 (正式写手)
★
humants(金币+1,VIP+0):谢谢你的帮助，这么久才评分不好意思，
我做过的蛋白也是包涵体,采取的就是PBS破碎然后洗涤包涵体.我超声的条件是5S,5S.20MIN,大约是240次吧,感觉长时间超声对包涵体没什么太大破坏,反而是时间短会使破碎不完全,蛋白量少.
赞一下(2人) 回复此楼
7楼2008-12-05 15:30:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fkbp23

木虫 (小有名气)
★
humants(金币+1,VIP+0):谢谢你的帮助，这么久才评分不好意思，
我们破大肠杆菌的方法是37度，液氮反复冻融，两到三次后即可，效果很好。
赞一下(2人) 回复此楼
8楼2008-12-05 18:51:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shawcat

木虫 (正式写手)
★
humants(金币+1,VIP+0):谢谢你的帮助，这么久才评分不好意思，
溶菌酶在冰浴条件会有酶活么？

破不完全有很多原因的：有杂菌，菌体浓度过高，培养基的问题（我的菌用国产的胰蛋白胨和进口的差别很大）。
赞一下(2人) 回复此楼
9楼2008-12-06 10:43:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 humants 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +55 医学老男孩 2026-08-13 123/6150 2026-08-19 23:44 by stan_et
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +12 基诺咪客 2026-08-17 16/800 2026-08-19 22:04 by kk 的小木虫
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 13/650 2026-08-19 21:28 by aasahr
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低？主要原因有哪些？ +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +4 yuleib84 2026-08-19 5/250 2026-08-19 19:52 by hhs666
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 什么时候开奖？ +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +10 yuleib84 2026-08-18 11/550 2026-08-19 07:30 by 羽毛枫f
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +13 Ldrop2023 2026-08-13 16/800 2026-08-18 12:25 by 淀粉搬运工
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭