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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR产物凝胶电泳，条带很弥散
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春春田花

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR产物凝胶电泳，条带很弥散

我扩的是细胞因子，不知道什么原因，每次都是这样，条带应该在300bp左右。是模板的问题吗，我引物都换了好几次了，结果也还是这样～求大神赐教

PCR产物凝胶电泳，条带很弥散


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1楼 2016-11-20 11:03:16
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18295276331

新虫 (初入文坛)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖 2016-11-20 12:16:20
咋看着像引物二聚体

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2楼2016-11-20 11:47:22
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kongzi183

银虫 (小有名气)
这是二聚体？可是二聚体还有特别亮的还有不亮的，也不对呀。应该是你体系问题吧。取样时候混匀了吗？酶混匀了吗？

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3楼2016-11-20 13:06:30
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春春田花

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 18295276331 at 2016-11-20 11:47:22
咋看着像引物二聚体

正中间那个很浅的是阴性对照啦～～感觉不像是引物二聚体

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4楼2016-11-20 13:47:55
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春春田花

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by kongzi183 at 2016-11-20 13:06:30
这是二聚体？可是二聚体还有特别亮的还有不亮的，也不对呀。应该是你体系问题吧。取样时候混匀了吗？酶混匀了吗？

嗯嗯，体系这些没有问题，我确定～跑过好几次，稀释模版也跑过，条带就变浅了，但还是很弥散，不知道是什么原因

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5楼2016-11-20 13:49:17
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迷路人啊

新虫 (小有名气)
如果引物浓度是10微摩的介意再稀释五倍就不会有引物二聚体了   二聚体和你的目的条带大小差不多   这可能是弥散的原因

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6楼2016-11-20 20:47:44
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春春田花

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 迷路人啊 at 2016-11-20 20:47:44
如果引物浓度是10微摩的介意再稀释五倍就不会有引物二聚体了   二聚体和你的目的条带大小差不多   这可能是弥散的原因

我中间那个没有条带的是阴性对照～

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7楼2016-11-20 22:15:03
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幸福宝宝宝宝

新虫 (正式写手)
是不是模版量大了点，或者是跑胶的原因，之前看别人说过好像是电压大了，然后就是电泳液时间过长了

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8楼2016-11-20 23:11:02
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迷路人啊

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 春春田花 at 2016-11-20 22:15:03
我中间那个没有条带的是阴性对照～
...

看结果应该是p出来了   但是没有引物二聚体图会好看点

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9楼2016-11-21 07:19:19
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