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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 请教一个关于葡聚糖凝胶纯化蛋白的问题
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cpu10427

至尊木虫 (著名写手)

[求助] 请教一个关于葡聚糖凝胶纯化蛋白的问题

我自己表达的蛋白，分子量80KD左右，先用NI柱纯化了一下，下面准备酶切掉N端的一个标签，切完后651个氨基酸分子量估计70KD多一点而的样子，准备把酶切后直接上葡聚糖凝胶柱纯化，问题是现在实验室有的填料是G-75,分离范围是3kd到80kd,我的分子量有些顶着他的上限了，是不是需要换G-100之类的填料？也就是说对于填料的选择跟自己的目标分子量之间的关系大概是什么样子的，谢谢？
另外我酶切下来的片段似乎不到10kd,然后用的酶是凝血酶，大概30多KD,应该不会影响我分离目标蛋白吧，谢谢啦
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1楼 2016-11-18 14:37:12
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cpu10427

至尊木虫 (著名写手)
求回复啊
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2楼2016-11-18 21:50:49
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cpu10427

至尊木虫 (著名写手)
木有人

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3楼2016-11-20 12:37:17
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ztt2015

新虫 (小有名气)
引用回帖:
1楼: Originally posted by cpu10427 at 2016-11-18 14:37:12
我自己表达的蛋白，分子量80KD左右，先用NI柱纯化了一下，下面准备酶切掉N端的一个标签，切完后651个氨基酸分子量估计70KD多一点而的样子，准备把酶切后直接上葡聚糖凝胶柱纯化，问题是现在实验室有的填料是G-75,分 ...

柱子用superdex200,正常情况下酶和标签不影响，但是如果酶切不完全或标签和蛋白折叠到一起去就不好说了。

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cpu10427
4楼2016-11-20 13:20:27
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cpu10427

至尊木虫 (著名写手)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by ztt2015 at 2016-11-20 13:20:27
柱子用superdex200,正常情况下酶和标签不影响，但是如果酶切不完全或标签和蛋白折叠到一起去就不好说了。
...

好的谢谢，200就是g200是吗？

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5楼2016-11-20 21:07:53
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ztt2015

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cpu10427 at 2016-11-20 21:07:53
好的谢谢，200就是g200是吗？
...

你查一下分离范围，只要在分离范围内就可以。

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6楼2016-11-20 21:35:20
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cpu10427

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by ztt2015 at 2016-11-20 21:35:20
你查一下分离范围，只要在分离范围内就可以。
...

好的，是不是比较接近分离范围中间的分离效果比较好？

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7楼2016-11-20 21:59:39
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ztt2015

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by cpu10427 at 2016-11-20 21:59:39
好的，是不是比较接近分离范围中间的分离效果比较好？
...

是的。

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8楼2016-11-20 22:04:36
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