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jms2011wlq

银虫 (小有名气)

[求助] 原生质体的分离中,洗涤原生质体的洗涤液和培养液都是什么? 已有2人参与

如题,原生质体的的分离中,最后用不含酶的洗涤液洗涤俩次,原生质体培养液洗涤一次,这里边的原生质体培养液怎么配置?

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liaoyiliao

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我一般用W5来洗,这是洗拟南芥原生质体的配方,其他的物种成分和浓度差别不大
W5 solution
2mM MES (pH 5.7)
154mM NaCl
125mM CaCl2
5 mM KCl.

来自这篇文献:Arabidopsis mesophyll protoplasts: a versatile cell system for transient gene expression analysis
7楼2016-12-17 15:36:47
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lostone

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
洗涤液嘛就是用来洗脱酶的,就是提供一个渗透势别让细胞涨破,主要是sorbitol,然后还有些如CaCl2、KCl这些盐,洗涤液也不重要
关键是后面培养液,这关键看你要干嘛,比方我分离原生质体用来做电生理,后面就直接按我的实验需求配我要的离子,而你如果只是要培养原生质体,那就去找文献用悬浮细胞的配方呗
2楼2016-11-19 20:11:21
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jms2011wlq

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lostone at 2016-11-19 20:11:21
洗涤液嘛就是用来洗脱酶的,就是提供一个渗透势别让细胞涨破,主要是sorbitol,然后还有些如CaCl2、KCl这些盐,洗涤液也不重要
关键是后面培养液,这关键看你要干嘛,比方我分离原生质体用来做电生理,后面就直接按 ...

感谢!

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3楼2016-11-20 17:44:41
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1361120671

新虫 (初入文坛)

不知阁下做的是动物细胞还是植物细胞,我做植物的培养用不加蔗糖和琼脂的MS培养基,洗液就用常规的pbs或者hbss缓冲液就好
4楼2016-11-22 09:46:22
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