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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 实验技术 » 原生质体的分离中，洗涤原生质体的洗涤液和培养液都是什么？
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jms2011wlq

银虫 (小有名气)

[求助] 原生质体的分离中，洗涤原生质体的洗涤液和培养液都是什么？ 已有2人参与

如题，原生质体的的分离中，最后用不含酶的洗涤液洗涤俩次，原生质体培养液洗涤一次，这里边的原生质体培养液怎么配置？

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考研不易，且行且惜
1楼 2016-11-17 21:51:38
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lostone

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
洗涤液嘛就是用来洗脱酶的，就是提供一个渗透势别让细胞涨破，主要是sorbitol，然后还有些如CaCl2、KCl这些盐，洗涤液也不重要
关键是后面培养液，这关键看你要干嘛，比方我分离原生质体用来做电生理，后面就直接按我的实验需求配我要的离子，而你如果只是要培养原生质体，那就去找文献用悬浮细胞的配方呗
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2楼2016-11-19 20:11:21
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jms2011wlq

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lostone at 2016-11-19 20:11:21
洗涤液嘛就是用来洗脱酶的，就是提供一个渗透势别让细胞涨破，主要是sorbitol，然后还有些如CaCl2、KCl这些盐，洗涤液也不重要
关键是后面培养液，这关键看你要干嘛，比方我分离原生质体用来做电生理，后面就直接按 ...

感谢！

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考研不易，且行且惜
3楼2016-11-20 17:44:41
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1361120671

新虫 (初入文坛)
不知阁下做的是动物细胞还是植物细胞，我做植物的培养用不加蔗糖和琼脂的MS培养基，洗液就用常规的pbs或者hbss缓冲液就好
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4楼2016-11-22 09:46:22
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jms2011wlq

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 1361120671 at 2016-11-22 09:46:22
不知阁下做的是动物细胞还是植物细胞，我做植物的培养用不加蔗糖和琼脂的MS培养基，洗液就用常规的pbs或者hbss缓冲液就好

蕨类植物

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考研不易，且行且惜
5楼2016-11-23 21:29:02
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jms2011wlq

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by jms2011wlq at 2016-11-23 21:29:02
蕨类植物
...

感谢

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考研不易，且行且惜
6楼2016-11-23 21:29:14
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liaoyiliao

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我一般用W5来洗，这是洗拟南芥原生质体的配方，其他的物种成分和浓度差别不大
W5 solution
2mM MES (pH 5.7)
154mM NaCl
125mM CaCl2
5 mM KCl.

来自这篇文献：Arabidopsis mesophyll protoplasts: a versatile cell system for transient gene expression analysis
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7楼2016-12-17 15:36:47
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