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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR扩增基因组DNA其中606 bp序列一直失败
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elmanbio

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

如果按照引物设计原则做的一般来说问题都不会很大，不过看样子你不属于这种情况；
模板首先确定么有问题？
引物序列你可以选择这个基因的保守序列来选择，多下些功夫，引物很关键
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11楼2017-07-31 14:33:35
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叫我扬子鳄

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

对引物这么自信的话就考虑一下模板吧，更换一下。再做梯度PCR
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12楼2017-07-31 19:10:36
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elmanbio

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

1 选择基因的保守序列设计引物
2 如果模板没有问题，基本上就是引物的问题了
3 引物设计完以后可以blast看一下引物的特异性怎么样
建议用premier来设计引物，其他软件虽然可以设计，但是我设计都是用的premier软件，成功率还是比较高的
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13楼2017-08-07 10:57:34
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lishuaiguang

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 叫我扬子鳄 at 2017-07-31 19:10:36
对引物这么自信的话就考虑一下模板吧，更换一下。再做梯度PCR

谢谢，后来我在上游和下游重新设计了引物，并扩增出了目的条带

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14楼2017-08-08 18:11:32
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lishuaiguang

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
13楼: Originally posted by elmanbio at 2017-08-07 10:57:34
1 选择基因的保守序列设计引物
2 如果模板没有问题，基本上就是引物的问题了
3 引物设计完以后可以blast看一下引物的特异性怎么样
建议用premier来设计引物，其他软件虽然可以设计，但是我设计都是用的premier软 ...

我也是用的Primer Prime 5设计的，后来在上游和下游又设计了几对，其中一对能扩增出来，真的是引物的问题。但是为什么其他几对扩增不出来，我至今不明白，位置相差也不是很远就一二百bp，能不能帮忙解释下我今天求助的那个问题

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15楼2017-08-08 18:15:09
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elmanbio

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

内容已删除
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16楼2017-08-09 10:32:15
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carl_mei

铁虫 (小有名气)
引物比对一下，做个退火温度梯度，换一个基因验证下扩增体系

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永远不走捷径！永远不对可能坏的事情好奇！永远不在仇恨和痛苦中做决定！
17楼2017-08-10 10:20:48
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