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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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elmanbio

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

如果按照引物设计原则做的一般来说问题都不会很大,不过看样子你不属于这种情况;
模板首先确定么有问题?
引物序列你可以选择这个基因的保守序列来选择,多下些功夫,引物很关键
11楼2017-07-31 14:33:35
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叫我扬子鳄

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

对引物这么自信的话就考虑一下模板吧,更换一下。再做梯度PCR
12楼2017-07-31 19:10:36
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elmanbio

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

1 选择基因的保守序列设计引物
2 如果模板没有问题,基本上就是引物的问题了
3 引物设计完以后可以blast看一下引物的特异性怎么样
建议用premier来设计引物,其他软件虽然可以设计,但是我设计都是用的premier软件,成功率还是比较高的
13楼2017-08-07 10:57:34
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lishuaiguang

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
12楼: Originally posted by 叫我扬子鳄 at 2017-07-31 19:10:36
对引物这么自信的话就考虑一下模板吧,更换一下。再做梯度PCR

谢谢,后来我在上游和下游重新设计了引物,并扩增出了目的条带

发自小木虫Android客户端
14楼2017-08-08 18:11:32
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lishuaiguang

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
13楼: Originally posted by elmanbio at 2017-08-07 10:57:34
1 选择基因的保守序列设计引物
2 如果模板没有问题,基本上就是引物的问题了
3 引物设计完以后可以blast看一下引物的特异性怎么样
建议用premier来设计引物,其他软件虽然可以设计,但是我设计都是用的premier软 ...

我也是用的Primer Prime 5设计的,后来在上游和下游又设计了几对,其中一对能扩增出来,真的是引物的问题。但是为什么其他几对扩增不出来,我至今不明白,位置相差也不是很远就一二百bp,能不能帮忙解释下我今天求助的那个问题

发自小木虫Android客户端
15楼2017-08-08 18:15:09
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elmanbio

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

内容已删除
16楼2017-08-09 10:32:15
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carl_mei

铁虫 (小有名气)

引物比对一下,做个退火温度梯度,换一个基因验证下扩增体系

发自小木虫Android客户端
永远不走捷径!永远不对可能坏的事情好奇!永远不在仇恨和痛苦中做决定!
17楼2017-08-10 10:20:48
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