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lishuaiguang

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR扩增基因组DNA其中606 bp序列一直失败已有3人参与

用基因组提取试剂盒提取了细胞的基因组DNA,电泳检测大于15000 bp处有单一亮条带,想扩增基因组其中一段序列,根据Genbank上的基因组序列设计了一套引物,上游引物跨内含子和外显子,下游引物在内含子中,产物大小为606 bp,扩了两次,换了两种高保真酶,都没有扩出来,电泳检测什么条带都没有。有没有大神给出建议,谢谢了!

@wizardfan 发自小木虫Android客户端
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elmanbio

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

1 选择基因的保守序列设计引物
2 如果模板没有问题,基本上就是引物的问题了
3 引物设计完以后可以blast看一下引物的特异性怎么样
建议用premier来设计引物,其他软件虽然可以设计,但是我设计都是用的premier软件,成功率还是比较高的
13楼2017-08-07 10:57:34
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lishuaiguang

新虫 (初入文坛)

2楼2016-11-16 10:28:21
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
完全没有条带吗?那可能是你的引物问题
···
3楼2016-11-16 22:12:04
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star013

新虫 (知名作家)


4楼2016-11-17 08:31:11
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