24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 1968  |  回复: 16
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

lishuaiguang

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR扩增基因组DNA其中606 bp序列一直失败已有3人参与

用基因组提取试剂盒提取了细胞的基因组DNA,电泳检测大于15000 bp处有单一亮条带,想扩增基因组其中一段序列,根据Genbank上的基因组序列设计了一套引物,上游引物跨内含子和外显子,下游引物在内含子中,产物大小为606 bp,扩了两次,换了两种高保真酶,都没有扩出来,电泳检测什么条带都没有。有没有大神给出建议,谢谢了!

@wizardfan 发自小木虫Android客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lishuaiguang

新虫 (初入文坛)

2楼2016-11-16 10:28:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lishuaiguang

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 小冀- at 2016-11-16 22:12:04
完全没有条带吗?那可能是你的引物问题

完全没有条带的,引物的设计就是根据一般的原则来设计的,这样的不合理的话,该怎么设计呢?

发自小木虫Android客户端
5楼2016-11-17 09:08:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lishuaiguang

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by star013 at 2016-11-17 08:31:11
引物设计不合理吧

引物的设计就是根据基因组序列来设计的,符合一般的原则

发自小木虫Android客户端
6楼2016-11-17 09:09:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lishuaiguang

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
12楼: Originally posted by 叫我扬子鳄 at 2017-07-31 19:10:36
对引物这么自信的话就考虑一下模板吧,更换一下。再做梯度PCR

谢谢,后来我在上游和下游重新设计了引物,并扩增出了目的条带

发自小木虫Android客户端
14楼2017-08-08 18:11:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lishuaiguang

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
13楼: Originally posted by elmanbio at 2017-08-07 10:57:34
1 选择基因的保守序列设计引物
2 如果模板没有问题,基本上就是引物的问题了
3 引物设计完以后可以blast看一下引物的特异性怎么样
建议用premier来设计引物,其他软件虽然可以设计,但是我设计都是用的premier软 ...

我也是用的Primer Prime 5设计的,后来在上游和下游又设计了几对,其中一对能扩增出来,真的是引物的问题。但是为什么其他几对扩增不出来,我至今不明白,位置相差也不是很远就一二百bp,能不能帮忙解释下我今天求助的那个问题

发自小木虫Android客户端
15楼2017-08-08 18:15:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lishuaiguang 的主题更新
信息提示
请填处理意见