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lishuaiguang

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR扩增基因组DNA其中606 bp序列一直失败已有3人参与

用基因组提取试剂盒提取了细胞的基因组DNA,电泳检测大于15000 bp处有单一亮条带,想扩增基因组其中一段序列,根据Genbank上的基因组序列设计了一套引物,上游引物跨内含子和外显子,下游引物在内含子中,产物大小为606 bp,扩了两次,换了两种高保真酶,都没有扩出来,电泳检测什么条带都没有。有没有大神给出建议,谢谢了!

@wizardfan 发自小木虫Android客户端
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elmanbio

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

如果按照引物设计原则做的一般来说问题都不会很大,不过看样子你不属于这种情况;
模板首先确定么有问题?
引物序列你可以选择这个基因的保守序列来选择,多下些功夫,引物很关键
11楼2017-07-31 14:33:35
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elmanbio

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

1 选择基因的保守序列设计引物
2 如果模板没有问题,基本上就是引物的问题了
3 引物设计完以后可以blast看一下引物的特异性怎么样
建议用premier来设计引物,其他软件虽然可以设计,但是我设计都是用的premier软件,成功率还是比较高的
13楼2017-08-07 10:57:34
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elmanbio

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

内容已删除
16楼2017-08-09 10:32:15
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