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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 求助，TA克隆卡了俩星期了，挑不到正确连接的阳性克隆！
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dahai0806702

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
25楼: Originally posted by David_王 at 2016-12-12 18:57:25
谢谢大家的建议和帮助。问题已经解决了。好久了，现在想起来总结一下。我重新overlap扩增了片段，回收回来浓度比以前高了，并且加A尾的过程延长到了30min，换了新的T载体（之前的时间可能有点久，效率比较低，现在回 ...

请问一下  后来换了什么载体
我现在与遇到类似的问题了，pcr  P出来了  转化连接这块老出问题，有时转化到DH5α涂板就不长菌，有的时候长菌但是测序发现不对

请教各位大神给些建议和帮助
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31楼2017-06-12 16:19:47
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涯天一方

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by 18721317208 at 2016-11-14 21:26:33
1.先加a尾，再胶回收，考虑到高保真酶的作用，建议头天做pcr，隔天加a。2.连接温度可以调整为22度过夜试试。3.一定要蓝白斑筛选，3000片段连接效率会非常低。正常情况就算提出质粒为空载，电泳检测应该也会在3000左 ...

我也遇到了质粒大小比实际小的问题，我想问是，我做完酶切后只切出一条带，理论是两条带才对，即使测序正确，回头做胶回收时用酶切还是直切一个条带呀
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32楼2017-07-07 00:34:42
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