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rhjilio

新虫 (小有名气)

11楼2016-11-16 06:58:53
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a6379137

木虫 (小有名气)

12楼2016-11-16 07:12:24
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zhl745671365

新虫 (正式写手)

酶切位点加了吗
13楼2016-11-16 08:19:24
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ULYSSEESWB

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
David_王: 金币+5, 有帮助 2016-12-12 18:52:17
16℃连接不要过夜,1-2小时就行。是否Amp有问题?
设置各种阴性对照,测试菌株,Amp,T载体是否有问题
14楼2016-11-16 08:30:39
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a13515517892

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这种片段稍微大一点的基因不建议TA克隆,考虑酶切的方法把,而且连接也不建议过夜,一般1小时足以
15楼2016-11-16 10:41:08
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David_王

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 18721317208 at 2016-11-14 21:26:33
1.先加a尾,再胶回收,考虑到高保真酶的作用,建议头天做pcr,隔天加a。2.连接温度可以调整为22度过夜试试。3.一定要蓝白斑筛选,3000片段连接效率会非常低。正常情况就算提出质粒为空载,电泳检测应该也会在3000左 ...

先加A尾再胶回收目的是提高插入片段浓度吗?已经订了IPTG和X-Gal配了平板,打算做蓝白斑筛选,希望有效果。
16楼2016-11-17 09:21:09
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David_王

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
10楼: Originally posted by kshdd at 2016-11-15 00:40:44
建议做克隆转化,感觉直接提质粒跑胶不靠谱

连接后转化DH5α了呀
17楼2016-11-17 09:21:56
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David_王

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
11楼: Originally posted by rhjilio at 2016-11-16 06:58:53
问题在载体!

我也感觉载体可能有点问题,已经重新订了新的T载体,打算再试一下。
18楼2016-11-17 09:22:37
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David_王

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
12楼: Originally posted by a6379137 at 2016-11-16 07:12:24
载体自连了吧

感觉从质粒大小来看,像是载体自连了。按理来说不应该有这么多的自连啊……
19楼2016-11-17 09:23:19
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David_王

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
13楼: Originally posted by zhl745671365 at 2016-11-16 08:19:24
酶切位点加了吗

什么酶切位点?是pcr片段上吗?设计了两个酶切位点,打算后续从T载体上酶切回收用的。
20楼2016-11-17 09:24:37
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