应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 求助，TA克隆卡了俩星期了，挑不到正确连接的阳性克隆！
322/4返回列表上一页1234下一页
查看: 4091  |  回复: 31
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

rhjilio

新虫 (小有名气)
问题在载体！

发自小木虫Android客户端
回复此楼
11楼2016-11-16 06:58:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a6379137

木虫 (小有名气)
载体自连了吧

发自小木虫Android客户端
回复此楼
12楼2016-11-16 07:12:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhl745671365

新虫 (正式写手)
酶切位点加了吗
回复此楼
13楼2016-11-16 08:19:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ULYSSEESWB

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
David_王: 金币+5, ★有帮助 2016-12-12 18:52:17
16℃连接不要过夜，1-2小时就行。是否Amp有问题？
设置各种阴性对照，测试菌株，Amp，T载体是否有问题
赞一下 回复此楼
14楼2016-11-16 08:30:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a13515517892

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这种片段稍微大一点的基因不建议TA克隆，考虑酶切的方法把，而且连接也不建议过夜，一般1小时足以
赞一下 回复此楼
15楼2016-11-16 10:41:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

David_王

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 18721317208 at 2016-11-14 21:26:33
1.先加a尾，再胶回收，考虑到高保真酶的作用，建议头天做pcr，隔天加a。2.连接温度可以调整为22度过夜试试。3.一定要蓝白斑筛选，3000片段连接效率会非常低。正常情况就算提出质粒为空载，电泳检测应该也会在3000左 ...

先加A尾再胶回收目的是提高插入片段浓度吗？已经订了IPTG和X-Gal配了平板，打算做蓝白斑筛选，希望有效果。
赞一下 回复此楼
16楼2016-11-17 09:21:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

David_王

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by kshdd at 2016-11-15 00:40:44
建议做克隆转化，感觉直接提质粒跑胶不靠谱

连接后转化DH5α了呀
赞一下 回复此楼
17楼2016-11-17 09:21:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

David_王

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by rhjilio at 2016-11-16 06:58:53
问题在载体！

我也感觉载体可能有点问题，已经重新订了新的T载体，打算再试一下。
赞一下 回复此楼
18楼2016-11-17 09:22:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

David_王

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by a6379137 at 2016-11-16 07:12:24
载体自连了吧

感觉从质粒大小来看，像是载体自连了。按理来说不应该有这么多的自连啊……
赞一下 回复此楼
19楼2016-11-17 09:23:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

David_王

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
13楼: Originally posted by zhl745671365 at 2016-11-16 08:19:24
酶切位点加了吗

什么酶切位点？是pcr片段上吗？设计了两个酶切位点，打算后续从T载体上酶切回收用的。
赞一下 回复此楼
20楼2016-11-17 09:24:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 David_王 的主题更新
322/4返回列表上一页1234下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 6/300 2026-09-06 18:21 by eObJPa4gWmp6
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 6/300 2026-09-06 18:09 by eObJPa4gWmp6
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 6/300 2026-09-06 18:01 by eObJPa4gWmp6
[找工作] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 8/400 2026-09-06 17:49 by eObJPa4gWmp6
[文学芳草园] 两块石头 +7 阿美_Lml888 2026-09-03 9/450 2026-09-06 17:48 by myrtle
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 6/300 2026-09-06 17:21 by eObJPa4gWmp6
[教师之家] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 9/450 2026-09-06 17:09 by eObJPa4gWmp6
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 3/150 2026-09-06 13:09 by eObJPa4gWmp6
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 3/150 2026-09-06 13:09 by eObJPa4gWmp6
[基金申请] 科研人应该花精力去思考如何解决问题，而不是去凝练问题 +10 瞬息宇宙 2026-09-01 19/950 2026-09-06 11:15 by jiangxuan2004
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 8/400 2026-09-06 11:09 by eObJPa4gWmp6
[论文投稿] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-04 8/400 2026-09-06 11:00 by eObJPa4gWmp6
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 4/200 2026-09-06 07:20 by E1iiBLMU2XnD
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +8 CRJ0Aq2FtVH0 2026-09-03 15/750 2026-09-06 05:48 by E1iiBLMU2XnD
[基金申请] 面上没中，邀请各位路过的虫友分析一下分数 +12 jackleilei 2026-09-03 13/650 2026-09-05 18:10 by fireguard
[文学芳草园] 初秋的晨风 +4 阿美_Lml888 2026-09-04 6/300 2026-09-05 13:51 by 阿美_Lml888
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗？ +6 瞬息宇宙 2026-08-31 9/450 2026-09-05 13:11 by haizai99
[硕博家园] Ei源刊怎么投 +4 Fengshun9711 2026-09-04 4/200 2026-09-04 19:30 by 研途知予
[硕博家园] 哈尔滨工业大学韩晓军教授课题组招收2027年硕士推免生及博士研究生 +3 灯灯灯灯DDDD 2026-09-03 3/150 2026-09-03 21:22 by 科研皮皮猪
[基金申请] 要骂人了，新模版改版就是要淡化问题凝练这种虚的东西，结果有个评委还在说凝练得不够 +9 瞬息宇宙 2026-08-31 17/850 2026-09-02 14:04 by anjeeshine
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭