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rhjilio

新虫 (小有名气)

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专业: 生物大分子结构与功能

问题在载体！

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11楼2016-11-16 06:58:53

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a6379137

木虫 (小有名气)

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载体自连了吧

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12楼2016-11-16 07:12:24

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zhl745671365

新虫 (正式写手)

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酶切位点加了吗

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13楼2016-11-16 08:19:24

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ULYSSEESWB

铁杆木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
David_王: 金币+5, ★有帮助 2016-12-12 18:52:17

16℃连接不要过夜，1-2小时就行。是否Amp有问题？
设置各种阴性对照，测试菌株，Amp，T载体是否有问题

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14楼2016-11-16 08:30:39

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a13515517892

木虫 (小有名气)

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专业: 抗体工程学

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

这种片段稍微大一点的基因不建议TA克隆，考虑酶切的方法把，而且连接也不建议过夜，一般1小时足以

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15楼2016-11-16 10:41:08

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David_王

新虫 (初入文坛)

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专业: 微生物药物

引用回帖:

8楼: Originally posted by 18721317208 at 2016-11-14 21:26:33
1.先加a尾，再胶回收，考虑到高保真酶的作用，建议头天做pcr，隔天加a。2.连接温度可以调整为22度过夜试试。3.一定要蓝白斑筛选，3000片段连接效率会非常低。正常情况就算提出质粒为空载，电泳检测应该也会在3000左 ...

先加A尾再胶回收目的是提高插入片段浓度吗？已经订了IPTG和X-Gal配了平板，打算做蓝白斑筛选，希望有效果。

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16楼2016-11-17 09:21:09

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