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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 延伸温度与引物的长度有关吗
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yakun123

铁虫 (小有名气)

[交流] 延伸温度与引物的长度有关吗 已有9人参与

我看实验室实验手册介绍，引物长度不宜过长，通常18-27bp.过长会导致其延伸温度大于74.不利于taq聚合酶进行反应。还有，引物的Tm值最好接近72，使得复性条件最佳。这句话什么意思，我只知道退火温度低于Tm值5左右，

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1楼 2016-11-14 11:16:28
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zilinweizhu

银虫 (小有名气)
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kuaile5420: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-11-18 18:29:01
引物长影响的是退火温度，过长还有可能增加非特异性匹配，一般延伸手温度选用聚合酶酶最适温度就可以

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8楼2016-11-15 12:01:53
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cry_2013

木虫 (正式写手)
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kuaile5420: 金币+1, 欢迎交流 2016-11-18 18:29:09
引物长，碱基数多了引物Tm值就可能增加。
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2楼2016-11-14 11:36:07
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lirujian1994

新虫 (初入文坛)
★
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引物长度不是影响退火温度么

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3楼2016-11-14 11:58:44
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yakun123

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cry_2013 at 2016-11-14 11:36:07
引物长，碱基数多了引物Tm值就可能增加。

引物长了会影响延伸温度吗，Tm会受到影响，可是延伸温度不都是一样的吗

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4楼2016-11-14 14:29:05
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yakun123

铁虫 (小有名气)
延伸温度会受引物长度影响吗？有大侠知道吗？

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5楼2016-11-14 22:18:34
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cry_2013

木虫 (正式写手)
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引用回帖:
4楼: Originally posted by yakun123 at 2016-11-14 14:29:05
引物长了会影响延伸温度吗，Tm会受到影响，可是延伸温度不都是一样的吗
...

引物主要和退火温度有关，我做实验延伸温度一般都是72度，至于引物长度会影响延伸温度还真没考虑过。。。。
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6楼2016-11-15 09:49:00
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18721317208

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
直接72就ok，不必纠结太多

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7楼2016-11-15 11:48:34
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mlxmiao

木虫 (著名写手)
看你用的酶

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9楼2016-11-15 20:47:12
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程大娘

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引物过长容易错配

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10楼2016-11-16 13:09:14
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