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PCR扩增结果有9个突变位点 已有3人参与
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我用的是地方猪的背最长肌的cDNA为模板，2?Taq MasterMix来扩增的CDS区，目的片段1121bp，再连t载体最后菌液pcr后去测序，结果与ncbi上的原始序列比对后，发现了9个突变位点，是不是有点多啊？ @biostar2009 @飞约疯人院 @wizardfan @youlinglyw 发自小木虫Android客户端 |
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
kuaile5420: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-11-16 23:44:17
感谢参与，应助指数 +1
kuaile5420: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-11-16 23:44:17
| 不是相同样品，如果基因也不是很保守的，序列有差异很正常。要排除就是选择双向测序，以及多测几个样本。上下两条链测出来互补的，应该就是测正确了，多次出现的，可以把偶然的突变看作的PCR造成的。测序结果做BLAST，找最相似的比对，不要只跟开始选择来参考的比对。跟最相似的序列还有差异的，翻译看看出来的氨基酸是什么，通常亮氨酸，异亮氨酸，缬氨酸等相似氨基酸突变对蛋白功能影响不大，发生几率很大的，可以推测是样本来源的这种猪带有的突变，其他的氨基酸也看看是不是变成相似的。一般对这样的突变无需理会，如果是表达活性蛋白，就先表达测定看看也可以。 |
7楼2016-11-11 00:31:36
2楼2016-11-09 17:49:09
aliaaxmu2016
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-11-11 07:16:31
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-11-11 07:16:31
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要看原始测序图AB1文件，就算他给你判读为txt文件了，你也要看，假如在两端有突变是不准确的，你要重新设计引物重新测那一段(末端) 发自小木虫Android客户端 |
3楼2016-11-09 17:59:31
yuhan131481
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4楼2016-11-09 18:06:03
