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丽姐萍妹

新虫 (正式写手)

[求助] 怎么提高胶回收浓度啊? 已有8人参与

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wuxchao

木虫 (小有名气)


西门吹雪170: 金币+1, MolEPI+1, 鼓励回帖交流 2016-11-03 22:53:00
西门吹雪170: MolEPI-1 2016-11-03 22:53:40
切胶时尽量切去多余的凝胶,最后洗脱时可以将第一次洗脱液加到吸附柱再洗脱一次

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5楼2016-11-03 22:42:18
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yudaoqian88

至尊木虫 (知名作家)

不良人

以上方法都对,但真正好用的就是第一次做扩增的时候多做几管,虽然浪费酶,但是不用反复做了!

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特别喜欢家门口开门的瞬间,宝宝那个高兴呀,蹦蹦跳跳,好不热闹!
12楼2016-11-04 08:49:19
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不挑食的蜗牛

新虫 (初入文坛)

可以用回收的片段作为模板,进行第二次PCR

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4楼2016-11-03 22:19:40
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
多切一点,切他5管在胶回收。
采菊东篱下,悠然见南山。
13楼2016-11-04 09:07:17
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rhapsody007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-11-07 07:18:45
1、跑电泳的时候,上样量要足够多,切胶的时候尽量小而精确
2、回收的时候可以加一些盐,回收效率应该会提高一些
3、可以考虑用磁珠进行回收,损失会少一些
吉恩特磁珠
15楼2016-11-04 11:21:39
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太子参

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-11-07 07:19:38
建议电泳前适当加大上样量,上样缓冲液中记得加入适当的甘油和蔗糖,这样可使样品密度增大,在点样时沉于点样孔底部,不扩散,最后,胶回收时建议在长波长紫外灯下观察凝胶,切下含有目的DNA片段的琼脂凝胶。如果能用胶回收试剂盒操作会更加完美。
31楼2016-11-06 11:43:56
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我要睡觉

新虫 (小有名气)

楼主!你胶回收后续是要干嘛呢?

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33楼2016-11-07 08:00:46
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zilinweizhu

银虫 (小有名气)

洗脱液加热一下,55度左右,然后静止2分钟再离心

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35楼2016-11-07 15:27:28
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sungel

银虫 (初入文坛)

如果单纯浓缩,可以用异丙醇沉淀,然后在溶解,可以稍微提高浓度

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36楼2016-11-07 16:56:43
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choujiaoqi

铁杆木虫 (知名作家)

多扩增几管回收,合并后,还可以用醋酸钠浓缩

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37楼2016-11-07 17:14:51
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didongwei

金虫 (著名写手)

溶解DNA时,将溶液放在水浴锅加热,可以提高效率

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不是优秀,而是不可替代
38楼2016-11-07 18:24:37
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普通回帖

kaobo2012

木虫 (正式写手)

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西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2016-11-03 22:56:19
你的片段有多大?小片段回收率确实低。
2楼2016-11-03 19:24:53
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丽姐萍妹

新虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by kaobo2012 at 2016-11-03 19:24:53
你的片段有多大?小片段回收率确实低。

我的有900多呢 可是条带不亮啊 不知道怎么做

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3楼2016-11-03 21:53:03
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丽姐萍妹

新虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 不挑食的蜗牛 at 2016-11-03 22:19:40
可以用回收的片段作为模板,进行第二次PCR

可是貌似我的引物特异性不够好 二次pcr可以吗?

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6楼2016-11-03 23:57:33
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丽姐萍妹

新虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by wuxchao at 2016-11-03 22:42:18
切胶时尽量切去多余的凝胶,最后洗脱时可以将第一次洗脱液加到吸附柱再洗脱一次



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7楼2016-11-03 23:57:44
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wuxchao

木虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 丽姐萍妹 at 2016-11-03 23:57:33
可是貌似我的引物特异性不够好 二次pcr可以吗?
...

可以的

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8楼2016-11-04 05:12:04
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万海付

木虫 (正式写手)

doallyoucando
9楼2016-11-04 07:44:22
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君恋多

新虫 (小有名气)

2次pcr可以,模板量不要大。

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10楼2016-11-04 07:46:00
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