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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 气相色谱出峰怪异，已经束手无策了——求高手解答！
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chaoyang0707

铜虫 (小有名气)

[求助] 气相色谱出峰怪异，已经束手无策了——求高手解答！ 已有2人参与

丙戊酸钠有关物质气相问题
一、基本情况介绍：
   主药对照：丙戊酸  
   杂质对照种类：丙酸、丁酸、戊酸、戊酰胺、辛酸、2-苯乙醇、USP杂质A、B、C（USP杂质也均为有机酸）；除USP杂质外其它杂质对照品均为高纯试剂（含量均在99%以上）。
   空白溶剂（稀释剂）：二氯甲烷
   色谱条件：进样口：220℃；检测器：220℃；柱温：130℃ 以10℃/min升温速率升到220℃
1、方法筛选过程主要以丙戊酸钠原料、自制品进样、混合对照（丙戊酸、丙酸、丁酸、戊酸、戊酰胺、辛酸、USP杂质A、B、C）进行筛选。
2、方法确认后单个杂质定位；发现单个杂质（丙酸、丁酸、戊酸、戊酰胺、辛酸、USP杂质A、B、C）自身峰外，在丙戊酸（主药）位置也出现色谱峰，而且所占比例为30%~40%；单进空白溶剂二氯甲烷在丙戊酸（主药）位置没有峰，进2-苯乙醇在丙戊酸（主药）位置也没有峰；发现规律为进酸性的杂质对照样，在丙戊酸（主药）位置均有较大的色谱峰出现。
二、问题排除：
1、排除溶剂污染问题：单进二氯甲烷主峰（丙戊酸）位置无干扰，表明溶剂无问题。
2、排除进样样品污染问题：多次重新配样和直接杂质对照（高纯试剂）进样，还是存在主峰（丙戊酸）位置出现干扰峰。
3、进样针污染及残留问题：多次洗针，洗针后，进二氯甲烷无峰，进杂质对照在主峰（丙戊酸）位置出现干扰峰。
4、仪器污染问题：清洗进样口及玻璃衬管，更换石英棉（所占比例为由30%~40%降到20%左右）；FID检测器更换了喷嘴，均无法解决进杂质对照在主峰（丙戊酸）位置出现干扰峰的问题。
5、色谱柱问题：更换色谱柱（换另一根色谱柱），也出现同样问题；
6、杂质对照品（高纯试剂）自身带有丙戊酸杂质：所有的有机酸均为高纯试剂，含量99%以上，即使存在所占比例也不可能这么高，而且多个杂质均含丙戊酸且都这么高？
7、二氯甲烷与对照品相容性问题：更换正己烷也出现同样问题；同时中国药典2015版，测定丙戊酸钠也是二氯甲烷作为稀释剂，应该不存在相容性问题。
8、仪器残留问题：单进二氯甲烷无峰；连续进一个杂质对照多针，丙戊酸干扰峰的大小及比例变化不大，即使残留比例有这么大？

项目时间比较急，望各位高手分析一下，不胜感激！！
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最美的不是雨天，而是曾与你躲过的屋檐！
1楼 2016-11-03 12:02:10
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远与近

铁杆木虫 (著名写手)
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11楼: Originally posted by chaoyang0707 at 2016-11-04 15:56:24
没有加主成分的混合对照没有进过，单个杂质都存在干扰，混起来也应该有吧！进混合对照前走过样品，最近几天没有样品，还有样品的主峰；样品进样量是5ul，样品浓度50mg/ml，分流比100:1；丙戊酸沸点221度，柱温现在 ...

1，你现在进行的是方法开发还是方法已经确定，你这个浓度的样品进样后峰面积是多大？
2，你已经换了（进样口及玻璃衬管，更换石英棉、FID检测器更换了喷嘴）这一块问题可以排除了，你可以把柱温在稍微提高一点。根据你的描述应该不是顶空系统所以系统清洗不用太麻烦，你可以把柱温升到柱子承受的最高温度上下20℃左右，老化几个小时，让残留的物质挥发出来。
3，你升温程序最后保留的时间是多长时间？如果短的话，可以把时间加长一点，这样可以祈祷防止有残留的作用。
4，“现在发现前一针的杂质有部分残留到下一针（但中间进了一针空白溶剂却没有残留）”，说明你稀释剂应该没有问题，有可能是你样品浓度过高，以至于有残留。你看是调整浓度还是分流比，调整一下再看
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12楼2016-11-04 16:27:41
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shi102241218

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这种样要用强极性柱，确实不太好做，再有如果是丙戊酸钠，肯定不出峰
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3楼2016-11-03 14:49:59
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远与近

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by chaoyang0707 at 2016-11-03 16:51:49
方法不适用，麻烦老师能具体说一下不？没有怎么明白你的意思？...

问题是在你混合进样时出现的，还是单个走样时就已经出现呢？你其他的情况都排除了，不是仪器的问题，不是污染的问题，也不是色谱柱的问题。那就剩下方法的和稀释剂的问题了，还有一个问题就是你这些样品有酸性物质也有碱性物质有没有可能发生反映？
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6楼2016-11-03 17:00:29
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shi102241218

木虫 (著名写手)
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5楼: Originally posted by chaoyang0707 at 2016-11-03 16:55:17
我们现在是所有的杂质都能分的开；丙戊酸钠测有关物质其实是把丙戊酸钠酸化成丙戊酸进气相测定的，现在的问题是我进丙戊酸钠其他杂质对照品是回会在主峰丙戊酸（主峰）位置也出现一个峰，而且比例还比较大...

做个气质看看主峰附近的峰是什么，
再有你用什么酸化的
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9楼2016-11-04 08:32:58
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远与近

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
chaoyang0707(费姚永芬代发): 金币+10, 辛苦了 2016-12-01 13:01:40
引用回帖:
8楼: Originally posted by chaoyang0707 at 2016-11-03 17:14:04
我们进杂质混合对照的时候，是加了主成分的，因此无法发现；单个杂质定位时，发现每个酸性杂质对照在主峰（丙戊酸）处都有一个较大的峰；稀释剂换过正己烷也是一样的情况...

你不加主成分走一个混合对照看一下。再进单个杂质前，你有没有走过样品？再有你觉得柱子里有残留那么你的进样量是多少，你柱子的最高温度能不能完全分解柱子里残留的成分呢。你要是担心仪器污染，那你清洗一下系统，先排除这个问题，在看别的情况
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10楼2016-11-04 09:47:40
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远与近

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by chaoyang0707 at 2016-11-04 17:04:54
非常感谢你的解答，
1、我们是在做方法开发，但根据杂质的分离情况已基本确定了这个方法；50mg/ml浓度，主峰面积是5百多万，其他单个杂质对照峰面积在5000~10000之间。
2、我们不是顶空进样；是直接手动进样；色 ...

如果有时间的话，建议你在调整一下。柱老化有点短，下次多烧一会儿。你这个最终的时间和你的升温梯度和时间有关，你最后的一步是以多少℃/min的速度上升的停留时间是多久？可在最后一步上适度加时间的。你还是先试一下浓度和分流比吧，这个不行的话，建议你换稀释剂，用DMSO等常用的气相稀释剂试一下。至于你说的是不是酸性的物质才会有残留的问题你现在也不能下结论呀，等你调整完后看效果就知道是什么问题了
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14楼2016-11-04 17:26:06
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superyeast

专家顾问 (职业作家)
你的样品为什么需要那么浓？如果你是根据文献做的，有可能是有误，应该是微克/毫升。因为“m”在符号字体里是“miu”，所以有的作者是打mg，然后改字体成为微克。但最后发表时可能统一字体，就又回到mg了。另外你的酸化是怎么做的？保证酸过量吗？用的什么酸？

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16楼2016-11-04 21:44:35
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远与近

铁杆木虫 (著名写手)

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你单个样品出峰时都没有杂志出现对吧？那么你混合之后呢？如果混合有的话，说明方法不合适
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2楼2016-11-03 13:49:05
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chaoyang0707

铜虫 (小有名气)
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2楼: Originally posted by 远与近 at 2016-11-03 13:49:05
你单个样品出峰时都没有杂志出现对吧？那么你混合之后呢？如果混合有的话，说明方法不合适

方法不适用，麻烦老师能具体说一下不？没有怎么明白你的意思？
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最美的不是雨天，而是曾与你躲过的屋檐！
4楼2016-11-03 16:51:49
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chaoyang0707

铜虫 (小有名气)
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3楼: Originally posted by shi102241218 at 2016-11-03 14:49:59
这种样要用强极性柱，确实不太好做，再有如果是丙戊酸钠，肯定不出峰

我们现在是所有的杂质都能分的开；丙戊酸钠测有关物质其实是把丙戊酸钠酸化成丙戊酸进气相测定的，现在的问题是我进丙戊酸钠其他杂质对照品是回会在主峰丙戊酸（主峰）位置也出现一个峰，而且比例还比较大
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最美的不是雨天，而是曾与你躲过的屋檐！
5楼2016-11-03 16:55:17
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chaoyang0707

铜虫 (小有名气)
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2楼: Originally posted by 远与近 at 2016-11-03 13:49:05
你单个样品出峰时都没有杂志出现对吧？那么你混合之后呢？如果混合有的话，说明方法不合适

你们气相做得多，经验丰富，我们现在比较倾向的是：1、这个主药残留在仪器内或色谱柱內，只有在进含酸性的物质的对照品，才能带出里面的主药丙戊酸，其他的空白溶剂、2-苯乙醇、戊酰胺都无法带出主药残留（只有这3个进样在丙戊酸主峰处不出峰）；2、丙酸、丁酸、戊酸、辛酸等酸性杂质在进样高温条件下分解成了丙戊酸或保留时间一直的物质；这两条的可能性是不是要大些？其他的确实想不到了，麻烦各位老师分析一下！急！！！
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7楼2016-11-03 17:09:21
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chaoyang0707

铜虫 (小有名气)
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6楼: Originally posted by 远与近 at 2016-11-03 17:00:29
问题是在你混合进样时出现的，还是单个走样时就已经出现呢？你其他的情况都排除了，不是仪器的问题，不是污染的问题，也不是色谱柱的问题。那就剩下方法的和稀释剂的问题了，还有一个问题就是你这些样品有酸性物质 ...

我们进杂质混合对照的时候，是加了主成分的，因此无法发现；单个杂质定位时，发现每个酸性杂质对照在主峰（丙戊酸）处都有一个较大的峰；稀释剂换过正己烷也是一样的情况
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最美的不是雨天，而是曾与你躲过的屋檐！
8楼2016-11-03 17:14:04
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