24小时热门版块排行榜    

查看: 1842  |  回复: 46
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

549088894

新虫 (小有名气)

[求助] 如果是想用PCR将基因片段上没有的33个碱基补充上去,如何设计引物? 已有6人参与

求大神帮忙看看,如果是想用PCR将基因片段上没有的33个碱基从5’端补充上去,如何设计引物?这样是不是要在原始上游引物上加上33bp?这样引物是不是要设计成五十多bp?这样可行吗?谢谢

@biostar2009 发自小木虫IOS客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

生物技术专业

铁虫 (小有名气)

8楼2016-10-24 18:05:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 47 个回答

无知的小强

木虫 (正式写手)

我觉得可以,就跟高通量测序需要barcode一样。                     不过,知道前面的序列,为什么不重新设计一个引物呢?

发自小木虫Android客户端
Behind the mask is an idea, and ideas are bulletproof.
2楼2016-10-24 14:04:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

549088894

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 无知的小强 at 2016-10-24 14:04:39
我觉得可以,就跟高通量测序需要barcode一样。                     不过,知道前面的序列,为什么不重新设计一个引物呢?

看到有文献是说两个物种不同,然后人的缺了N端33个碱基,如果是体外克隆表达缺了这33个碱基会造成活性的降低,所以只能通过这种方法加上去

发自小木虫IOS客户端
3楼2016-10-24 14:13:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

无知的小强

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 549088894 at 2016-10-24 14:13:35
看到有文献是说两个物种不同,然后人的缺了N端33个碱基,如果是体外克隆表达缺了这33个碱基会造成活性的降低,所以只能通过这种方法加上去
...

我觉得如果有前边序列信息的话(其他近缘物种也行),重新设计比较好。

如果在引物上+33个碱基,熔解温度啥的不好弄了。

别的就不知道啦

发自小木虫Android客户端
Behind the mask is an idea, and ideas are bulletproof.
4楼2016-10-24 14:20:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 澳大利亚 Murdoch University 全奖博士招生(3个名额)地质化工冶金领域 +13 AI8RaGaPaSCR 2026-08-07 14/700 2026-08-13 17:15 by KC9MWU4rq4LU
[文学芳草园] 阿姨 +3 汪汪锅 2026-08-09 3/150 2026-08-13 16:56 by 410610288
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +4 majunge000 2026-08-11 6/300 2026-08-13 16:50 by 四季常青藤
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +5 医学老男孩 2026-08-13 11/550 2026-08-13 15:41 by sdfapple719
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +3 启萌科技 2026-08-12 6/300 2026-08-13 15:34 by 高飞的梦想
[基金申请] FileCode能看出啥? +8 要乐观耀哥 2026-08-10 26/1300 2026-08-13 12:01 by Tide man
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +9 majunge000 2026-08-10 11/550 2026-08-13 10:40 by ZH远山
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +22 Lanmanbaby 2026-08-09 36/1800 2026-08-12 22:50 by sdfapple719
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变,有变的大神么? +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 固定端突然变了,今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
信息提示
请填处理意见