24小时热门版块排行榜

>论坛更新日志 (3498)
>虫友互识 (989)
>文献求助 (269)
>导师招生 (172)
>休闲灌水 (164)
>考博 (135)
>教师之家 (89)
>硕博家园 (83)
>博后之家 (82)
>论文投稿 (78)
>找工作 (77)
>论文道贺祈福 (67)
>基金申请 (67)
>考研 (58)
>公派出国 (51)
>招聘信息布告栏 (38)

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

zeyuanzi

新虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 166.3
帖子: 152
在线: 18.4小时
虫号: 4849839
注册: 2016-07-18
性别: MM
专业: 生物物理、生物化学与分子

[求助] 求感受态细胞制备的标准步骤已有1人参与

如题，制备感受态一直失败，氯化钙浓度0.05还是0.1,简单灭菌吗，还有什么需要注意的，求大神介绍一下，感激不尽

发自小木虫Android客户端

回复此楼

» 猜你喜欢

1楼 2016-10-11 10:38:20

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

queen3511

铜虫 (小有名气)

应助: 26 (小学生)
金币: 296.8
散金: 30
红花: 6
帖子: 164
在线: 60.3小时
虫号: 910406
注册: 2009-11-23
性别: MM
专业: 蛋白质组学

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

大肠杆菌DH5α/M15感受态细胞的制备(CaCl2法)
1) 将大肠杆菌接种于20mL LB液体培养基中，37℃振荡(200rpm左右)过夜(12h左右)培养(至对数生长期)；
2) 将1mL 过夜培养的菌液移入50mL LB液体培养基(一般为1：50的比例)中，37℃振荡培养至OD600为0.5-0.6，放于冰上30min；
3) 取1mL菌液于1.5mL无菌eppendorf管中，4℃，4000rpm 离心10min，去上清；
4) 沉淀用1mL预冷的0.1mol.L-1 CaCl2悬浮，用枪头轻轻吹打混匀，于冰上放置30min；
5) 4℃，4000rpm 离心10min，去上清，沉淀再加200μl的0.1 mol.L-1 CaCl2重悬，冰上放置2-7h后，用于转化；或每管加20-30%的灭菌甘油，混匀，－70℃保存。
注意：要无菌操作，感受态始终要低温