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zeyuanzi新虫 (小有名气)
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求感受态细胞制备的标准步骤 已有1人参与
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如题，制备感受态一直失败，氯化钙浓度0.05还是0.1,简单灭菌吗，还有什么需要注意的，求大神介绍一下，感激不尽 发自小木虫Android客户端 |
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zeyuanzi
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4楼2016-10-11 11:35:00
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2楼2016-10-11 10:59:08
zeyuanzi
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3楼2016-10-11 11:34:00
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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大肠杆菌DH5α/M15感受态细胞的制备(CaCl2法) 1) 将大肠杆菌接种于20mL LB液体培养基中，37℃振荡(200rpm左右)过夜(12h左右)培养(至对数生长期)； 2) 将1mL 过夜培养的菌液移入50mL LB液体培养基(一般为1：50的比例)中，37℃振荡培养至OD600为0.5-0.6，放于冰上30min； 3) 取1mL菌液于1.5mL无菌eppendorf管中，4℃，4000rpm 离心10min，去上清； 4) 沉淀用1mL预冷的0.1mol.L-1 CaCl2悬浮，用枪头轻轻吹打混匀，于冰上放置30min； 5) 4℃，4000rpm 离心10min，去上清，沉淀再加200μl的0.1 mol.L-1 CaCl2重悬，冰上放置2-7h后，用于转化；或每管加20-30%的灭菌甘油，混匀，－70℃保存。 注意：要无菌操作，感受态始终要低温 |
5楼2016-10-11 13:42:39