| 查看: 1304 | 回复: 5 | ||
zeyuanzi新虫 (小有名气)
|
[求助]
求感受态细胞制备的标准步骤 已有1人参与
|
|
如题，制备感受态一直失败，氯化钙浓度0.05还是0.1,简单灭菌吗，还有什么需要注意的，求大神介绍一下，感激不尽 发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
碳青霉烯类抗生素为何需联用西司他丁钠？ | Biochempartner
已经有0人回复
-
源自蕨类植物的抗炎美白活性分子去甲氧基荚果蕨素 | Biochempartner
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有231人回复
-
肠道里的"代谢开关"：Fexaramine用肠道限制性重新定义 FXR 激动剂
已经有0人回复
-
DMXAA：从血管破坏剂到STING通路研究的关键工具分子 | Biochempartner
已经有0人回复
-
靶向PD-L1的人源化单克隆抗体阿特珠单抗
已经有0人回复
-
"探针之父"(+)-JQ-1如何改变表观遗传研究 | Biochempartner
已经有0人回复
-
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
010308Jing
木虫 (正式写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 3149.2
- 散金: 73
- 红花: 6
- 帖子: 552
- 在线: 125.1小时
- 虫号: 2146845
- 注册: 2012-11-25
- 性别: MM
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
2楼2016-10-11 10:59:08
zeyuanzi
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 166.3
- 帖子: 152
- 在线: 18.4小时
- 虫号: 4849839
- 注册: 2016-07-18
- 性别: MM
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
3楼2016-10-11 11:34:00
zeyuanzi
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 166.3
- 帖子: 152
- 在线: 18.4小时
- 虫号: 4849839
- 注册: 2016-07-18
- 性别: MM
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
4楼2016-10-11 11:35:00
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
|
大肠杆菌DH5α/M15感受态细胞的制备(CaCl2法) 1) 将大肠杆菌接种于20mL LB液体培养基中，37℃振荡(200rpm左右)过夜(12h左右)培养(至对数生长期)； 2) 将1mL 过夜培养的菌液移入50mL LB液体培养基(一般为1：50的比例)中，37℃振荡培养至OD600为0.5-0.6，放于冰上30min； 3) 取1mL菌液于1.5mL无菌eppendorf管中，4℃，4000rpm 离心10min，去上清； 4) 沉淀用1mL预冷的0.1mol.L-1 CaCl2悬浮，用枪头轻轻吹打混匀，于冰上放置30min； 5) 4℃，4000rpm 离心10min，去上清，沉淀再加200μl的0.1 mol.L-1 CaCl2重悬，冰上放置2-7h后，用于转化；或每管加20-30%的灭菌甘油，混匀，－70℃保存。 注意：要无菌操作，感受态始终要低温 |
5楼2016-10-11 13:42:39
张凡云
至尊木虫 (职业作家)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 13426.7
- 散金: 3094
- 红花: 13
- 帖子: 4118
- 在线: 1487.5小时
- 虫号: 2426111
- 注册: 2013-04-19
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
6楼2016-10-13 15:51:46