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MIDNA

铁虫 (小有名气)

应助: 3 (幼儿园)
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专业: 生物大分子结构与功能

[求助] 有关双酶切问题，求助！！！已有5人参与

我做了好几次酶切，但总没有切下来目的条带！是怎么回事啊？希望各位师兄师姐帮助解决！！！

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默默搜寻

1楼 2016-10-08 16:17:54

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

原海亮

木虫 (著名写手)

应助: 232 (大学生)
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性别: GG
专业: 微生物生理与生物化学

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-10-08 22:16:55

你这个质粒是筛选的克隆么？如果是就两个原因吧，第一，克隆载体为阴性的，这个你可以用特异性引物或者通用引物来做个PCR验证，确定一下载体上面有没有目的条带，如果根本没有目的片段插入，你双酶切也是没有目的条带；第二，你的载体是有目的条带的，那么原因一方面可能是有些酶容易甲基化等一些修饰导致酶切位点失效，这个可以看看酶的说明书，如果是这样，可以换为载体上的其他酶，来进行验证。另一个原因或许就是你使用的酶有问题了，阔以尝试更换新酶试一下，祝好！

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