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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 有关双酶切问题，求助！！！
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MIDNA

铁虫 (小有名气)

[求助] 有关双酶切问题，求助！！！ 已有5人参与

我做了好几次酶切，但总没有切下来目的条带！是怎么回事啊？希望各位师兄师姐帮助解决！！！
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默默搜寻
1楼 2016-10-08 16:17:54
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yvonne9044

新虫 (正式写手)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-10 21:53:02
原因可能很多，你尽量多做对照，不知道你质粒检测了没有，测序要是没有问题就要考虑内切酶是不是有问题，有的酶最适温度不同，或者不能共用一个buffer,还有就是切下来的片段太少电泳看不见？那就还是酶效率的问题

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10楼2016-10-10 00:20:25
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010308Jing

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-10-08 22:16:32
xn8008: 应助指数+1 2016-10-10 21:50:44
有可能是buffer的问题，也有可能是模板本身的问题，可以把模板测个序，看看那两个酶切位点是不是在

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2楼2016-10-08 16:37:06
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MIDNA

铁虫 (小有名气)
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-10-10 21:50:49
引用回帖:
2楼: Originally posted by 010308Jing at 2016-10-08 16:37:06
有可能是buffer的问题，也有可能是模板本身的问题，可以把模板测个序，看看那两个酶切位点是不是在

那两个酶切位点是确定在的啊，可就是切不下来？？
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默默搜寻
3楼2016-10-08 16:44:26
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010308Jing

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-10 21:50:54
xn8008: 应助指数+1 2016-10-10 21:51:15
你测过了吗？我们现在也遇到了这种情况，在addgene上买的，给我序列是有那两个酶切位点，但是切不动，现在只能去测序验证下

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4楼2016-10-08 16:48:22
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