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周燕ZHY

新虫 (初入文坛)

[交流] 构超表达载体 已有8人参与

各位大神们,我近期一直在构超表达载体,PBI121载体切的挺好,可一直连不上。转大肠转了无数次,啥条带都没有,请问应该如何改善?谢谢大神们
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viki_MDK

银虫 (正式写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-21 08:36:49
连接酶或者感受态问题
2楼2016-09-19 14:05:06
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star013

新虫 (知名作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
xn8008: 屏蔽内容, 违规存档 2016-09-21 08:36:55
本帖内容被屏蔽

3楼2016-09-19 17:10:22
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霍进喜

银虫 (初入文坛)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-21 08:37:00
最好把你的实验流程详细的说下,那样别人也好分析原因

发自小木虫Android客户端
4楼2016-09-20 20:06:34
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mlxmiao

木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-21 08:37:06
in-fusion吧!很好用的

发自小木虫Android客户端
5楼2016-09-20 21:55:57
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我花了18年

银虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-09-23 22:18:45
1,你可以做下对照看能不能长出克隆,如果有克隆则说明感受态没问题,;
2,分析下酶切有没有问题,是否产生互补的黏性末端;
3,实验室有没有其他人近期构建质粒成功的,如果有,则说明试剂基本上没问题。
做一件事情,没有值不值得,只是想不想。
6楼2016-09-21 08:37:56
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lianfeng1107

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
推荐用in-fusion,高效。
7楼2016-09-21 08:58:14
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magy2006

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
片段纯度很重要,有杂质会干扰连接。另外连接一天以上吧,4度。好运
8楼2016-09-21 10:17:27
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hattie919822

银虫 (初入文坛)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-09-23 22:19:10
1.如果你是双酶切的话,可能出现的情况是只有单酶切成功了
2.酶的buffer溶解太多次的话会降低连接效率,或者整个体系的问题
3.目的片段是否进行了纯度回收
4.载体酶切后要进行去磷酸化以防止自连接出现假阳性
5.感受态细胞
不见不知不伴不惜不
9楼2016-09-23 17:46:09
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star013

新虫 (知名作家)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我们公司可以提供载体构建技术服务,也可以做蛋白表达纯化技术服务

发自小木虫Android客户端
10楼2016-09-25 09:02:43
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