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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 构超表达载体
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周燕ZHY

新虫 (初入文坛)

[交流] 构超表达载体 已有8人参与

各位大神们，我近期一直在构超表达载体，PBI121载体切的挺好，可一直连不上。转大肠转了无数次，啥条带都没有，请问应该如何改善？谢谢大神们
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1楼 2016-09-19 10:53:13
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viki_MDK

银虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-21 08:36:49
连接酶或者感受态问题
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2楼2016-09-19 14:05:06
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star013

新虫 (知名作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
xn8008: 屏蔽内容, 违规存档 2016-09-21 08:36:55
本帖内容被屏蔽
3楼2016-09-19 17:10:22
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霍进喜

银虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-21 08:37:00
最好把你的实验流程详细的说下，那样别人也好分析原因

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4楼2016-09-20 20:06:34
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mlxmiao

木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-21 08:37:06
in-fusion吧！很好用的

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5楼2016-09-20 21:55:57
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我花了18年

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-09-23 22:18:45
1，你可以做下对照看能不能长出克隆，如果有克隆则说明感受态没问题,；
2，分析下酶切有没有问题，是否产生互补的黏性末端；
3，实验室有没有其他人近期构建质粒成功的，如果有，则说明试剂基本上没问题。
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做一件事情，没有值不值得，只是想不想。
6楼2016-09-21 08:37:56
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lianfeng1107

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
推荐用in-fusion,高效。
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7楼2016-09-21 08:58:14
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magy2006

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
片段纯度很重要，有杂质会干扰连接。另外连接一天以上吧，4度。好运
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8楼2016-09-21 10:17:27
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hattie919822

银虫 (初入文坛)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-09-23 22:19:10
1.如果你是双酶切的话，可能出现的情况是只有单酶切成功了
2.酶的buffer溶解太多次的话会降低连接效率，或者整个体系的问题
3.目的片段是否进行了纯度回收
4.载体酶切后要进行去磷酸化以防止自连接出现假阳性
5.感受态细胞
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不见不知不伴不惜不
9楼2016-09-23 17:46:09
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star013

新虫 (知名作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我们公司可以提供载体构建技术服务，也可以做蛋白表达纯化技术服务

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10楼2016-09-25 09:02:43
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