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1楼 2016-09-05 19:45:53

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曼陀罗的祈祷

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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-09-05 22:37:01

marker能跑出来就代表不是胶的问题，要么是你扩增体系或扩增的问题，1，是否忘记加东西，比如DNTP，比如酶，比如模板，还有，你的模板质量如何？
2.扩增问题的话，你的目标片段大小多少，引物退火温度多少，延伸多长时间，多少循环

想做个有趣的人，却在逗比的道路上越走越远~

2楼2016-09-05 20:01:03

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cry_2013

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如果模板和扩增体系没问题的话，也可能引物的问题

5楼2016-09-06 10:54:22

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tayifeita

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-09-06 22:25:07

cDna是由rna利用随机引物得来，你得先确定你cDna有没有？浓度定过量吗？？你这个pcr体系没多大问题，只要试剂不过期，还有你的引物没问题。如果上述都没问题的话建议用1.5的胶跑着看看，2%也行。从cdna模板上扩增的片段应该不大，所以用高浓度的胶跑。

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7楼2016-09-06 16:38:33

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tayifeita

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7楼: Originally posted by tayifeita at 2016-09-06 16:38:33
cDna是由rna利用随机引物得来，你得先确定你cDna有没有？浓度定过量吗？？你这个pcr体系没多大问题，只要试剂不过期，还有你的引物没问题。如果上述都没问题的话建议用1.5的胶跑着看看，2%也行。从cdna模板上扩增的 ...

补充一下，你的引物最好要用primer5或oligo分析一下发卡结构之类的，没有条带很大可能是引物的原因，pcr程序里面退火温度58的话，一般没多大问题。

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8楼2016-09-06 16:44:22

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huihey

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2楼: Originally posted by 曼陀罗的祈祷 at 2016-09-05 20:01:03
marker能跑出来就代表不是胶的问题，要么是你扩增体系或扩增的问题，1，是否忘记加东西，比如DNTP，比如酶，比如模板，还有，你的模板质量如何？
2.扩增问题的话，你的目标片段大小多少，引物退火温度多少，延伸多 ...

我都加了阿？操作问题吗？可是我已经试了第五次了，难道是酶不行？dntp 都是新拿出来的

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3楼2016-09-05 21:03:03

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模版是学长配的，应该是没问题吧。。

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4楼2016-09-05 21:05:16

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周义杰

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酶可以确定没问题吗？

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6楼2016-09-06 12:50:09

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010308Jing

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有没有引物二聚体或者杂带啊？很有可能是模板的问题

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9楼2016-09-06 18:38:29

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3楼: Originally posted by huihey at 2016-09-05 21:03:03
我都加了阿？操作问题吗？可是我已经试了第五次了，难道是酶不行？dntp 都是新拿出来的

...

换高保真酶，降低退火温度，核对引物序列！应该有效果

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