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huihey

新虫 (初入文坛)

[求助] 用1%的琼脂糖凝胶电泳,跑pcr基因扩增物跑不出来 已有8人参与

用1%的琼脂糖凝胶电泳,跑pcr基因扩增产物,只有marker能跑出来,分了四组,eb什么的都加了,跑了4组

用1%的琼脂糖凝胶电泳,跑pcr基因扩增物跑不出来


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曼陀罗的祈祷

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-09-05 22:37:01
marker能跑出来就代表不是胶的问题,要么是你扩增体系或扩增的问题,1,是否忘记加东西,比如DNTP,比如酶,比如模板,还有,你的模板质量如何?
2.扩增问题的话,你的目标片段大小多少,引物退火温度多少,延伸多长时间,多少循环
想做个有趣的人,却在逗比的道路上越走越远~
2楼2016-09-05 20:01:03
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cry_2013

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
如果模板和扩增体系没问题的话,也可能引物的问题
5楼2016-09-06 10:54:22
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tayifeita

木虫 (小有名气)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-09-06 22:25:07
cDna是由rna利用随机引物得来,你得先确定你cDna有没有?浓度定过量吗??你这个pcr体系没多大问题,只要试剂不过期,还有你的引物没问题。如果上述都没问题的话建议用1.5的胶跑着看看,2%也行。从cdna模板上扩增的片段应该不大,所以用高浓度的胶跑。

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7楼2016-09-06 16:38:33
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tayifeita

木虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by tayifeita at 2016-09-06 16:38:33
cDna是由rna利用随机引物得来,你得先确定你cDna有没有?浓度定过量吗??你这个pcr体系没多大问题,只要试剂不过期,还有你的引物没问题。如果上述都没问题的话建议用1.5的胶跑着看看,2%也行。从cdna模板上扩增的 ...

补充一下,你的引物最好要用primer5或oligo分析一下发卡结构之类的,没有条带很大可能是引物的原因,pcr程序里面退火温度58的话,一般没多大问题。

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8楼2016-09-06 16:44:22
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huihey

新虫 (初入文坛)

xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-06 08:23:14
引用回帖:
2楼: Originally posted by 曼陀罗的祈祷 at 2016-09-05 20:01:03
marker能跑出来就代表不是胶的问题,要么是你扩增体系或扩增的问题,1,是否忘记加东西,比如DNTP,比如酶,比如模板,还有,你的模板质量如何?
2.扩增问题的话,你的目标片段大小多少,引物退火温度多少,延伸多 ...

我都加了阿?操作问题吗?可是我已经试了第五次了,难道是酶不行?dntp 都是新拿出来的
用1%的琼脂糖凝胶电泳,跑pcr基因扩增物跑不出来-1



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3楼2016-09-05 21:03:03
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huihey

新虫 (初入文坛)

xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-06 08:23:19
引用回帖:
2楼: Originally posted by 曼陀罗的祈祷 at 2016-09-05 20:01:03
marker能跑出来就代表不是胶的问题,要么是你扩增体系或扩增的问题,1,是否忘记加东西,比如DNTP,比如酶,比如模板,还有,你的模板质量如何?
2.扩增问题的话,你的目标片段大小多少,引物退火温度多少,延伸多 ...

模版是学长配的,应该是没问题吧。。

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4楼2016-09-05 21:05:16
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周义杰

新虫 (初入文坛)

6楼2016-09-06 12:50:09
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010308Jing

木虫 (正式写手)

有没有引物二聚体或者杂带啊?很有可能是模板的问题

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9楼2016-09-06 18:38:29
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梦想天行

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by huihey at 2016-09-05 21:03:03
我都加了阿?操作问题吗?可是我已经试了第五次了,难道是酶不行?dntp 都是新拿出来的

...

换高保真酶,降低退火温度,核对引物序列!应该有效果

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10楼2016-09-06 21:07:30
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