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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 用1%的琼脂糖凝胶电泳，跑pcr基因扩增物跑不出来
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yuying0421

新虫 (职业作家)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-09-09 22:35:17
有时间确实有操作的问题，多做几遍，你可以多配几倍混合液，减少误差，觉得酶加的有点多，0.2就够了吧！

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11楼2016-09-07 09:26:28
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盏溪、鸿焱

金虫 (小有名气)
增加循环数。过夜pcr试试。

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12楼2016-09-07 12:53:52
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qiaolianwen

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
多试几个退火温度
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结束了，哪些没有自我的日子；新生活，开始了！
13楼2016-09-07 15:30:34
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wangxiao318

银虫 (小有名气)
PCR完了先定一下浓度，别着急跑胶。现在看来应该是扩增的问题，并且模版或者引物的问题可能性比较大，建议排查这两个方向。35个循环已经很大了，没必要再增加了。

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14楼2016-09-08 22:56:46
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疯子J-F

木虫 (著名写手)
我也遇到了相同的问题，有时候就是不出来

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15楼2016-09-08 23:14:17
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小李1314

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 梦想天行 at 2016-09-06 21:07:30
换高保真酶，降低退火温度，核对引物序列！应该有效果
...

可以换引物，酶，试一试，
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16楼2016-09-09 09:41:38
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1520113

新虫 (初入文坛)
请问你们用的哪个牌子的琼脂糖凝胶电泳仪呢？谢谢你了

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17楼2016-09-09 17:45:05
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SUCKED

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

讲道理朋友，看一下你的退火温度是不是有问题，调一下，按说，如果marker有的话，那么在电泳这一步是没有问题的，但你没说你跑了多长时间的电泳，也不知道你的电泳点样的分子量是多大。。。。。只能建议你看一下你的退火温度了，按说引物一般是没有问题的
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18楼2016-09-09 18:04:41
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zyj塔塔

新虫 (初入文坛)
目的片段大小不一样，所用的pcr体系也不太一样

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19楼2016-09-09 20:56:22
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yuy111

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

CDNA needs to be ran a gel and determine the quality and quantity. Then to determine the PCR system is working etc.
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20楼2016-09-10 01:26:36
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