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SnaB Ⅰ/Avr Ⅱ双酶切切不开的原因?
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实验过程: 1000bp的目的基因连在Blunt simple克隆载体上,NEB的酶,50微升体系,先用Avr Ⅱ切过夜,清洁试剂盒回收后再用SnaB Ⅰ切3h。 说明书上说1h就可以搞定,但我切了3h还是条带很淡(质粒条带很亮)(再久的话会有星号活性),尝试胶回收,但根本看不到回收后的目的条带。 请问,这可能是什么原因呢? 不知道保护碱基对酶切有没有影响? 没有找到SnaB Ⅰ的保护碱基,自己随便加了6个(GATCCA) |
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