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空载体双酶切，出现两天带
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空载体大概是8000bp左右，双酶切后有的出现单条带，有的出现了两天带，不理解，求虫友解惑，对做了同样的双酶切的目的条带进行了T4连接酶连接，转化涂板都是一个菌落都没长，重复了三次。仍然是一个菌落都没长。 发自小木虫IOS客户端 |
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2楼2016-08-11 09:24:57
3楼2016-08-11 09:25:17
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你首先要确定你的空载体是否正确，空载体酶切胶回收后，需要再次跑电泳确认你是否回收成功，然后再去做T4连接。 发自小木虫Android客户端 |
4楼2016-08-11 11:35:03
5楼2016-08-11 13:04:45
swgcpy
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6楼2016-08-11 20:21:57
7楼2016-08-11 23:33:21
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那你多做几个样品来酶切，最终回收到一个EP管里面，酶切后的空载体浓度最高在15ng/ul以上，最后做连接是才容易连上。 发自小木虫Android客户端 |
8楼2016-08-12 01:55:00
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酶切载体最好过夜酶切，如果切得不彻底，会导自载体自连。通常酶切载体是20微升体系中酶切1ug的载体质粒，做4-6个重复，酶切后用50微升的大孔点样回收，且最好加公司赠送的10Xloading buffer，在跑电泳时有利于DNA的沉降，自己配的6Xloading bufferwe 可以，但效果没有那么好。 发自小木虫Android客户端 |
9楼2016-08-12 02:02:45
10楼2016-08-12 23:17:09