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化蝶为谁舞

新虫 (初入文坛)

[求助] 空载体双酶切,出现两天带

空载体大概是8000bp左右,双酶切后有的出现单条带,有的出现了两天带,不理解,求虫友解惑,对做了同样的双酶切的目的条带进行了T4连接酶连接,转化涂板都是一个菌落都没长,重复了三次。仍然是一个菌落都没长。

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化蝶为谁舞

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 点瓣心音 at 2016-08-12 02:02:45
酶切载体最好过夜酶切,如果切得不彻底,会导自载体自连。通常酶切载体是20微升体系中酶切1ug的载体质粒,做4-6个重复,酶切后用50微升的大孔点样回收,且最好加公司赠送的10Xloading buffer,在跑电泳时有利于DNA的 ...

谢谢,换了loading buffer后条带很亮,已经解决了

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10楼2016-08-12 23:17:09
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化蝶为谁舞

新虫 (初入文坛)


xn8008: 金币+1, 欢迎发帖提问 2016-08-12 07:12:01
2楼2016-08-11 09:24:57
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化蝶为谁舞

新虫 (初入文坛)


xn8008: 金币+1, 欢迎发帖提问 2016-08-12 07:12:08
3楼2016-08-11 09:25:17
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点瓣心音

木虫 (小有名气)

★ ★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-08-11 22:23:50
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-08-12 07:12:18
你首先要确定你的空载体是否正确,空载体酶切胶回收后,需要再次跑电泳确认你是否回收成功,然后再去做T4连接。

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4楼2016-08-11 11:35:03
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