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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 空载体双酶切，出现两天带
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化蝶为谁舞

新虫 (初入文坛)

[求助] 空载体双酶切，出现两天带

空载体大概是8000bp左右，双酶切后有的出现单条带，有的出现了两天带，不理解，求虫友解惑，对做了同样的双酶切的目的条带进行了T4连接酶连接，转化涂板都是一个菌落都没长，重复了三次。仍然是一个菌落都没长。

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1楼 2016-08-11 09:23:46
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化蝶为谁舞

新虫 (初入文坛)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-08-12 07:12:37
引用回帖:
6楼: Originally posted by swgcpy at 2016-08-11 20:21:57
双酶切两个位点之间距离有多少个bp呢，8kb的载体把两个位点除去之后有多大
500bp以下的条带还有可能是RNA等，提质粒的时候有可能会出现

两个酶切位点之间只有几十个bp,但是切后有八千和一个两千多的就比较奇怪了

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7楼2016-08-11 23:33:21
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化蝶为谁舞

新虫 (初入文坛)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖提问 2016-08-12 07:12:01
空载体双酶切，出现两天带

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2楼2016-08-11 09:24:57
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化蝶为谁舞

新虫 (初入文坛)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖提问 2016-08-12 07:12:08
空载体双酶切，出现两天带-1

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3楼2016-08-11 09:25:17
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点瓣心音

木虫 (小有名气)
★ ★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-08-11 22:23:50
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-08-12 07:12:18
你首先要确定你的空载体是否正确，空载体酶切胶回收后，需要再次跑电泳确认你是否回收成功，然后再去做T4连接。

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4楼2016-08-11 11:35:03
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