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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 做同源重组双交换
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黄小萌萌

银虫 (小有名气)

[求助] 做同源重组双交换 已有2人参与

做同源重组双交换，想突变掉一个致死基因，发生第一次交换后能否使基因失活？上同源臂不是从起始密码子开始的，上下游各400bp.
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1楼 2016-08-09 08:54:58
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不吃M的鱼

金虫 (小有名气)
不是很清楚，但是400bp的同源臂是否太短？仅供参考，觉得700-800比较合适

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2楼2016-08-09 09:56:33
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wangyurong

至尊木虫 (著名写手)

none

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-08-11 22:24:49
你说的单交换是插入突变？不是置换，有可能是随机插入，也可能是插在基因的上/下游同源壁，插在基因的上/下游同源壁究竟是否使目的基因失活，需要验证，证明起来比较困难，荧光定量看基因是否表达？表达了是否是与插入的标记基因融合？还是置换说服力比较大，替换后，基因不表达，
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none
3楼2016-08-09 16:57:31
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黄小萌萌

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wangyurong at 2016-08-09 16:57:31
你说的单交换是插入突变？不是置换，有可能是随机插入，也可能是插在基因的上/下游同源壁，插在基因的上/下游同源壁究竟是否使目的基因失活，需要验证，证明起来比较困难，荧光定量看基因是否表达？表达了是否是与插 ...

什么是随机插入？有可能插到目的基因以外的位置吗？

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4楼2016-08-09 20:32:44
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黄小萌萌

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wangyurong at 2016-08-09 16:57:31
你说的单交换是插入突变？不是置换，有可能是随机插入，也可能是插在基因的上/下游同源壁，插在基因的上/下游同源壁究竟是否使目的基因失活，需要验证，证明起来比较困难，荧光定量看基因是否表达？表达了是否是与插 ...

可以留个联系方式吗？互相交流，互相学习

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5楼2016-08-09 20:34:43
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2016-08-11 22:25:12
你的同源臂是在目的基因的起始密码子和终止密码子的前后400么？这样做的理论敲掉的是哪一段序列呢？我们一般是敲掉目的基因内部一段序列就默认这个基因被破坏了。另外双交换时候，第一次交换应该是整个载体整合到基因组上去吧，这时候目标基因还是完整的，发生第二次交换后，才会把两个同源臂之间的序列缺失掉，回复突变除外，祝好。

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黄小萌萌
天空才是极限，我有信心飞的更高！
6楼2016-08-11 19:37:28
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黄小萌萌

银虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-08-11 19:37:28
你的同源臂是在目的基因的起始密码子和终止密码子的前后400么？这样做的理论敲掉的是哪一段序列呢？我们一般是敲掉目的基因内部一段序列就默认这个基因被破坏了。另外双交换时候，第一次交换应该是整个载体整合到基 ...

双交换时，上游同源臂不是从起始密码子开始的，距离了有十几bp

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7楼2016-08-11 23:19:19
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