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nawei8726

至尊木虫 (职业作家)

[求助] 烦请大侠帮忙设计下引物,谢谢 已有2人参与

目的基因:phkg1   NM-001293144.1
主要是扩CDS区
烦请烦请大侠帮忙设计下引物,谢谢

不胜感激
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nawei8726

至尊木虫 (职业作家)

送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by stone2239 at 2016-08-07 21:28:30
你提供的信息仍然不够。你是要以猪的RNA反转录产物cDNA为模板扩增吧,一般构建表达载体,需要扩出完整的CDS区,并且为了构建载体,根据插入位点扩增产物需要带有相应酶切位点,另外,你是要做融合表达还是独立表达? ...

我之前设的引物跑出来目的条带了,但是后来就不行了,总是重复不出来。 RNA浓度的1247.1ng/ul,OD值260/280为1.74,230/260为1.05,然后逆转录后的cDNA的浓度4637.6ng/ul,OD值260/280为1.71,230/260为1.97,然后就是扩不出来,真的心累啊

发自小木虫Android客户端
9楼2016-08-07 21:45:21
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的实验目的是什么呢?扩出来的片段后续做什么用?

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2016-08-07 18:59:26
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xn8008

至尊木虫 (知名作家)

Balance Angel

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
目的不同,引物设计理念不同,我希望真的你设计的引物打算做哪种PCR

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

奋斗是我们前进的动力!
3楼2016-08-07 20:10:35
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nawei8726

至尊木虫 (职业作家)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2016-08-07 18:59:26
你的实验目的是什么呢?扩出来的片段后续做什么用?

你好, 是构建表达载体, 就是普通PCR,扩增完整CDS区,构建真核表达载体, 用primee5就可以了

发自小木虫Android客户端
4楼2016-08-07 20:52:21
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