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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 烦请大侠帮忙设计下引物，谢谢
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nawei8726

至尊木虫 (职业作家)

[求助] 烦请大侠帮忙设计下引物，谢谢 已有2人参与

目的基因：phkg1   NM-001293144.1
主要是扩CDS区
烦请烦请大侠帮忙设计下引物，谢谢

不胜感激
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1楼 2016-08-07 15:57:54
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的实验目的是什么呢？扩出来的片段后续做什么用？
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nawei8726
2楼2016-08-07 18:59:26
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xn8008

至尊木虫 (知名作家)

Balance Angel

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
目的不同，引物设计理念不同，我希望真的你设计的引物打算做哪种PCR
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

nawei8726
奋斗是我们前进的动力！
3楼2016-08-07 20:10:35
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nawei8726

至尊木虫 (职业作家)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2016-08-07 18:59:26
你的实验目的是什么呢？扩出来的片段后续做什么用？

你好， 是构建表达载体， 就是普通PCR，扩增完整CDS区，构建真核表达载体， 用primee5就可以了

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4楼2016-08-07 20:52:21
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nawei8726

至尊木虫 (职业作家)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by xn8008 at 2016-08-07 20:10:35
目的不同，引物设计理念不同，我希望真的你设计的引物打算做哪种PCR

你好， 是构建表达载体， 就是普通PCR，扩增完整CDS区，构建真核表达载体， 用primer5就可以了

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5楼2016-08-07 20:53:23
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nawei8726

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
4楼: Originally posted by nawei8726 at 2016-08-07 20:52:21
你好， 是构建表达载体， 就是普通PCR，扩增完整CDS区，构建真核表达载体， 用primee5就可以了
...

primer5

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6楼2016-08-07 20:53:59
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-08-07 22:12:38
你提供的信息仍然不够。你是要以猪的RNA反转录产物cDNA为模板扩增吧，一般构建表达载体，需要扩出完整的CDS区，并且为了构建载体，根据插入位点扩增产物需要带有相应酶切位点，另外，你是要做融合表达还是独立表达？这些因素都关系到引物设计。
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nawei8726
7楼2016-08-07 21:28:30
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nawei8726

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
7楼: Originally posted by stone2239 at 2016-08-07 21:28:30
你提供的信息仍然不够。你是要以猪的RNA反转录产物cDNA为模板扩增吧，一般构建表达载体，需要扩出完整的CDS区，并且为了构建载体，根据插入位点扩增产物需要带有相应酶切位点，另外，你是要做融合表达还是独立表达？ ...

是的。 独立表达， 用的是pEGFP-N3-载体。谢谢

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8楼2016-08-07 21:38:41
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nawei8726

至尊木虫 (职业作家)
送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by stone2239 at 2016-08-07 21:28:30
你提供的信息仍然不够。你是要以猪的RNA反转录产物cDNA为模板扩增吧，一般构建表达载体，需要扩出完整的CDS区，并且为了构建载体，根据插入位点扩增产物需要带有相应酶切位点，另外，你是要做融合表达还是独立表达？ ...

我之前设的引物跑出来目的条带了，但是后来就不行了，总是重复不出来。 RNA浓度的1247.1ng/ul,OD值260/280为1.74,230/260为1.05,然后逆转录后的cDNA的浓度4637.6ng/ul,OD值260/280为1.71，230/260为1.97,然后就是扩不出来，真的心累啊

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9楼2016-08-07 21:45:21
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star013

新虫 (知名作家)
我们公司可以提供该技术服务

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10楼2016-08-08 18:29:20
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