应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 烦请大侠帮忙设计下引物，谢谢
101/1返回列表
查看: 1116  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

nawei8726

至尊木虫 (职业作家)

[求助] 烦请大侠帮忙设计下引物，谢谢 已有2人参与

目的基因：phkg1   NM-001293144.1
主要是扩CDS区
烦请烦请大侠帮忙设计下引物，谢谢

不胜感激
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2016-08-07 15:57:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的实验目的是什么呢？扩出来的片段后续做什么用？
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

nawei8726
2楼2016-08-07 18:59:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xn8008

至尊木虫 (知名作家)

Balance Angel

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
目的不同，引物设计理念不同，我希望真的你设计的引物打算做哪种PCR
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

nawei8726
奋斗是我们前进的动力！
3楼2016-08-07 20:10:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nawei8726

至尊木虫 (职业作家)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2016-08-07 18:59:26
你的实验目的是什么呢？扩出来的片段后续做什么用？

你好， 是构建表达载体， 就是普通PCR，扩增完整CDS区，构建真核表达载体， 用primee5就可以了

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2016-08-07 20:52:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nawei8726

至尊木虫 (职业作家)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by xn8008 at 2016-08-07 20:10:35
目的不同，引物设计理念不同，我希望真的你设计的引物打算做哪种PCR

你好， 是构建表达载体， 就是普通PCR，扩增完整CDS区，构建真核表达载体， 用primer5就可以了

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2016-08-07 20:53:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nawei8726

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
4楼: Originally posted by nawei8726 at 2016-08-07 20:52:21
你好， 是构建表达载体， 就是普通PCR，扩增完整CDS区，构建真核表达载体， 用primee5就可以了
...

primer5

发自小木虫Android客户端
回复此楼
6楼2016-08-07 20:53:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-08-07 22:12:38
你提供的信息仍然不够。你是要以猪的RNA反转录产物cDNA为模板扩增吧，一般构建表达载体，需要扩出完整的CDS区，并且为了构建载体，根据插入位点扩增产物需要带有相应酶切位点，另外，你是要做融合表达还是独立表达？这些因素都关系到引物设计。
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

nawei8726
7楼2016-08-07 21:28:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nawei8726

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
7楼: Originally posted by stone2239 at 2016-08-07 21:28:30
你提供的信息仍然不够。你是要以猪的RNA反转录产物cDNA为模板扩增吧，一般构建表达载体，需要扩出完整的CDS区，并且为了构建载体，根据插入位点扩增产物需要带有相应酶切位点，另外，你是要做融合表达还是独立表达？ ...

是的。 独立表达， 用的是pEGFP-N3-载体。谢谢

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
8楼2016-08-07 21:38:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nawei8726

至尊木虫 (职业作家)
送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by stone2239 at 2016-08-07 21:28:30
你提供的信息仍然不够。你是要以猪的RNA反转录产物cDNA为模板扩增吧，一般构建表达载体，需要扩出完整的CDS区，并且为了构建载体，根据插入位点扩增产物需要带有相应酶切位点，另外，你是要做融合表达还是独立表达？ ...

我之前设的引物跑出来目的条带了，但是后来就不行了，总是重复不出来。 RNA浓度的1247.1ng/ul,OD值260/280为1.74,230/260为1.05,然后逆转录后的cDNA的浓度4637.6ng/ul,OD值260/280为1.71，230/260为1.97,然后就是扩不出来，真的心累啊

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
9楼2016-08-07 21:45:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

star013

新虫 (知名作家)
我们公司可以提供该技术服务

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
10楼2016-08-08 18:29:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 nawei8726 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 澳大利亚 Murdoch University 全奖博士招生（3个名额）地质化工冶金领域 +15 AI8RaGaPaSCR 2026-08-07 16/800 2026-08-13 17:45 by mhIP3HAX38ZI
[基金申请] FileCode能看出啥？ +9 要乐观耀哥 2026-08-10 27/1350 2026-08-13 17:41 by goon12
[文学芳草园] 阿姨 +3 汪汪锅 2026-08-09 3/150 2026-08-13 16:56 by 410610288
[基金申请] filecode +14 documentary 2026-08-10 16/800 2026-08-13 16:39 by 润生71
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +3 启萌科技 2026-08-12 6/300 2026-08-13 15:34 by 高飞的梦想
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了，巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +9 majunge000 2026-08-10 11/550 2026-08-13 10:40 by ZH远山
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +22 Lanmanbaby 2026-08-09 36/1800 2026-08-12 22:50 by sdfapple719
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7 布布和一二 2026-08-10 10/500 2026-08-12 09:12 by 布布和一二
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[硕博家园] 读博的好处 +3 lnee 2026-08-11 3/150 2026-08-11 18:10 by 希望我好好的
[基金申请] 什么时候出结果，有咨询渠道？？？ +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了，国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变，有变的大神么？ +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭