应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 定量PCR
321/4返回列表1234下一页
查看: 1913  |  回复: 31
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

lanmengyixin

新虫 (初入文坛)

[求助] 定量PCR 已有7人参与

各位大神，我最近刚开始做定量PCR，结果没有CT值，也没有成峰，如下图，这是什么原因？求解答

定量PCR
Melt Curve Plot0805.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2016-08-06 19:16:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

lanmengyixin

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by prthefu at 2016-08-07 22:54:57
我最近也在做。我觉得开始的时候，你可以直接上机做预实验，确定体系的加量和退火温度。然后每次做完看溶解曲线如何。还有，前体是你要确保引物没有问题，模板反转录也是正确的，最后给的建议是，多做几次，自己在每 ...

谢谢！我们实验室做定量PCR都是固定体系，退火温度也是仪器的固定设置，从来没有改过。我再多做几次试试吧！

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
18楼2016-08-08 12:14:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

曼陀罗的祈祷

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我是直接设计好几对引物，然后拿去做普通pcr，然后看跟actin引物扩增亮度最接近的，就选了那一对
赞一下(1人) 回复此楼
想做个有趣的人，却在逗比的道路上越走越远~
25楼2016-08-09 12:59:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

取个什么名啊

木虫 (正式写手)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-08-07 08:25:22
你用的是什么仪器
赞一下 回复此楼
2楼2016-08-06 20:01:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lanmengyixin

新虫 (初入文坛)
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-08-07 08:25:27
引用回帖:
2楼: Originally posted by 取个什么名啊 at 2016-08-06 20:01:11
你用的是什么仪器

ABI的仪器

发自小木虫Android客户端
回复此楼
3楼2016-08-06 20:41:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

取个什么名啊

木虫 (正式写手)
你上机前做预实验了吗

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
4楼2016-08-07 08:27:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hanxiaominhu

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
先用普通的PCR检测一下看看能不能P出条带。
赞一下 回复此楼
5楼2016-08-07 08:32:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wjf7862203

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-08-07 22:12:07
这是溶解曲线图，你用的探针法还是染料法，染料法时候采用溶解曲线，判定扩增特异性。你这张图上看，是没有检测到目标基因。需要分析的原因很多，首先引物设计对不对，模板有没有提取来，试剂是否失效等很多问题
赞一下 回复此楼
6楼2016-08-07 14:36:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lanmengyixin

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by wjf7862203 at 2016-08-07 14:36:15
这是溶解曲线图，你用的探针法还是染料法，染料法时候采用溶解曲线，判定扩增特异性。你这张图上看，是没有检测到目标基因。需要分析的原因很多，首先引物设计对不对，模板有没有提取来，试剂是否失效等很多问题

用的是SYBR MIX。引物比对了，没有问题。同样的模板也做其他引物了，溶解曲线都是单峰，所以不知道这是什么原因！难道是本身就不表达这个基因？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
7楼2016-08-07 21:01:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lanmengyixin

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by hanxiaominhu at 2016-08-07 08:32:00
先用普通的PCR检测一下看看能不能P出条带。

定量的引物可以做普通PCR吗？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
8楼2016-08-07 21:03:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lanmengyixin

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 取个什么名啊 at 2016-08-07 08:27:59
你上机前做预实验了吗

没有做预实验，因为之前的文献有过报道，说是会调控这个基因！

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
9楼2016-08-07 21:04:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hanxiaominhu

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by lanmengyixin at 2016-08-07 21:03:06
定量的引物可以做普通PCR吗？
...

可以的。

发自小木虫Android客户端
回复此楼
10楼2016-08-07 21:58:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lanmengyixin 的主题更新
321/4返回列表1234下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +4 瞬息宇宙 2026-08-10 4/200 2026-08-10 10:23 by allmydream
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +6 布布和一二 2026-08-08 6/300 2026-08-10 09:37 by xter9665
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分？ +7 yufeiwaner 2026-08-09 7/350 2026-08-10 09:08 by zju2000
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +8 Lanmanbaby 2026-08-09 15/750 2026-08-10 08:54 by 医学老男孩
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于代码变化问题，想知道的进来 +15 且听虎啸 2026-08-07 22/1100 2026-08-09 22:13 by 布布和一二
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[考博] 【2027博士申请】纳米药物递送方向 20+3 13586093586 2026-08-03 5/250 2026-08-08 21:54 by 13586093586
[基金申请] 好奇怪的filecode +3 布布和一二 2026-08-08 4/200 2026-08-08 17:46 by zhanghaozhu
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变，有变的大神么？ +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] 听说今天filecode变了 +24 布布和一二 2026-08-06 47/2350 2026-08-07 16:02 by zhiyanjiang
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] 大家散了吧，后缀研究没有意义，别浪费时间了，过好目前的每一天，不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] 8月时间戳变的，举个手。玩一下，释放压力 +9 archvillain 2026-08-04 11/550 2026-08-05 20:06 by wlwhappy
[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[基金申请] 纯娱乐，不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
[基金申请] 什么时候能放榜呀？ +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭