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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 定量PCR
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prthefu

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我最近也在做。我觉得开始的时候，你可以直接上机做预实验，确定体系的加量和退火温度。然后每次做完看溶解曲线如何。还有，前体是你要确保引物没有问题，模板反转录也是正确的，最后给的建议是，多做几次，自己在每个小环节找找问题吧。祝实验顺利！
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nothing is impossible in this world，if you have the will to win，you can achieve anything
11楼2016-08-07 22:54:57
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xincer

木虫 (小有名气)
能否详细地说明。上扩增曲线图包括对数和线性

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12楼2016-08-07 23:32:46
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vanchy

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可否确定DNase污染
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13楼2016-08-08 09:16:54
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daweizi

新虫 (初入文坛)
楼主，有没有Abi实验电子版操作说明书啊，感兴趣，想研究一下

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14楼2016-08-08 10:00:28
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daweizi

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by daweizi at 2016-08-08 10:00:28
楼主，有没有Abi实验电子版操作说明书啊，感兴趣，想研究一下

就是那个染料法的，我做的东西染料这个方向，所以感兴趣

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15楼2016-08-08 10:02:03
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skull123

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
8楼: Originally posted by lanmengyixin at 2016-08-07 21:03:06
定量的引物可以做普通PCR吗？
...

可以做普通pcr的
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16楼2016-08-08 10:28:24
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lanmengyixin

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by daweizi at 2016-08-08 10:00:28
楼主，有没有Abi实验电子版操作说明书啊，感兴趣，想研究一下

这个真没有，我们实验室做的是25ul体系的，每个孔加1ul cDNA,1.5ul 引物，10.5ul水，11ul SYBR，然后就上机。退火温度都是系统设置的，也没有改过，整个程序下来时间是1h46min

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17楼2016-08-08 12:12:08
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lanmengyixin

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by prthefu at 2016-08-07 22:54:57
我最近也在做。我觉得开始的时候，你可以直接上机做预实验，确定体系的加量和退火温度。然后每次做完看溶解曲线如何。还有，前体是你要确保引物没有问题，模板反转录也是正确的，最后给的建议是，多做几次，自己在每 ...

谢谢！我们实验室做定量PCR都是固定体系，退火温度也是仪器的固定设置，从来没有改过。我再多做几次试试吧！

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18楼2016-08-08 12:14:24
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lanmengyixin

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
16楼: Originally posted by skull123 at 2016-08-08 10:28:24
可以做普通pcr的...

好的，谢谢！我试一下！

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19楼2016-08-08 12:14:47
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295249857

新虫 (初入文坛)
楼主，如果你同样的模板做其他引物都正常的话，我认为原因可能出在基因表达量太低，或者是引物需要重新设计。
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20楼2016-08-08 14:50:22
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