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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 引物污染问题
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化蝶为谁舞

新虫 (初入文坛)

[求助] 引物污染问题 已有4人参与

做了菌液PCR，发现片段大小是对的，然后送去测序，发现都是空载体，老师怀疑是我引物污染，下面这张图是我对引物做的PCR,前11个为十一对引物,12 14 16为质粒PCR,13 15 16也事质粒对应的阴性对照。求大神分析

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1楼 2016-07-26 21:25:41
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
没看到图。菌液PCR假阳性比例还是很高的，建议提质粒做个酶切验证再送测序。
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2楼2016-07-27 10:11:00
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化蝶为谁舞

新虫 (初入文坛)
引物污染问题

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3楼2016-07-27 11:05:56
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化蝶为谁舞

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2016-07-27 10:11:00
没看到图。菌液PCR假阳性比例还是很高的，建议提质粒做个酶切验证再送测序。

下面我附图了，帮我看下哈

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4楼2016-07-27 11:06:46
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 化蝶为谁舞 at 2016-07-27 11:06:46
下面我附图了，帮我看下哈
...

没看懂你的图，提质粒做个酶切验证吧。
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5楼2016-07-27 12:34:49
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化蝶为谁舞

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by stone2239 at 2016-07-27 12:34:49
没看懂你的图，提质粒做个酶切验证吧。...

目前我就是卡在酶切那块，提质粒做酶切，电泳检测啥都没有。。。很郁闷

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6楼2016-07-27 17:10:44
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 化蝶为谁舞 at 2016-07-27 17:10:44
目前我就是卡在酶切那块，提质粒做酶切，电泳检测啥都没有。。。很郁闷
...

那重新做连接转化吧
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7楼2016-07-27 18:26:00
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化蝶为谁舞

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by stone2239 at 2016-07-27 18:26:00
那重新做连接转化吧...

唉，那不一笑回到解放前了。。

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8楼2016-07-27 23:10:53
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css910320

银虫 (正式写手)
你做一个阴性对照

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9楼2016-07-28 10:54:27
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heianduck

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
空载基本上是没有连接上,重新转化连接吧
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10楼2016-07-28 12:09:57
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