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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR没有条带
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23柚子茶23

新虫 (小有名气)

[求助] PCR没有条带 已有5人参与

这是提的基因组，用的mix体系，退火温度区间是54-64，都没有条带，有大神能分析一下原因吗？

PCR没有条带


@biostar2009 发自小木虫Android客户端
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1楼 2016-07-23 15:50:52
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

晴空姜

新虫 (正式写手)
contamination  建议buffer DNTP primer等都换新的 另外有阳性对照 阴性对照和TE吗

发自小木虫Android客户端
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2楼2016-07-23 20:37:41
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淘七九懒

铁杆木虫 (著名写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-07-26 22:16:47
首先确定，所用的材料没有问题。你说提的基因组？还是扩增基因组上的目的基因？引物设计也很重要，确定引物没有问题！温度可以从40度开始扩增，一般温度越高特异性越高！希望有所帮助！

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7楼2016-07-25 13:05:25
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Chsir

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
退火温度，引物特异性，我觉得应该从这两个方面看看，再做个阴性对照，把模板DNA换成灭菌水
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8楼2016-07-25 16:25:36
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普通回帖

23柚子茶23

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 晴空姜 at 2016-07-23 20:37:41
contamination  建议buffer DNTP primer等都换新的 另外有阳性对照 阴性对照和TE吗

mix体系的东西都是固定好了的，没办法换，你说的阳性和阴性对照分别怎么做？

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3楼2016-07-24 16:27:43
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不爱做实验

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-07-26 22:16:23
1、检查DNA提取的质量
2、引物是否具有特异性
3、温度条件是否合适:
    一般可将第一个退火温度适当降低，先获得目的片段，再进行后续多次循环
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4楼2016-07-24 16:51:10
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安静de执着14

新虫 (著名写手)
dna浓度太大，dna模板减少试试。

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5楼2016-07-24 17:06:56
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houfuyuan

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
跑得程序呢？用的什么酶？扩长片段要用特定的酶。还有延伸时间加长。
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玉无瑕，青春无华。
6楼2016-07-24 19:22:59
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hbtmsw

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-07-26 22:17:47
要么是引物加多了 ,要么是模板太多或是杂质太多,前面一大片亮的要么是引物二聚体,要么就是模板中美除去的RNA,改进措施是降低引物浓度和模板添加量,提取的基因组最好是用RNA酶处理一下.
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9楼2016-07-26 09:56:47
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阿尔卑斯英

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
对照Marker多大，怎么看都像是提取的RNA还带着基因组污染。
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10楼2016-07-26 15:22:13
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