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23柚子茶23

新虫 (小有名气)

[求助] PCR没有条带 已有5人参与

这是提的基因组,用的mix体系,退火温度区间是54-64,都没有条带,有大神能分析一下原因吗?

PCR没有条带


@biostar2009 发自小木虫Android客户端
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晴空姜

新虫 (正式写手)

contamination  建议buffer DNTP primer等都换新的 另外有阳性对照 阴性对照和TE吗

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2楼2016-07-23 20:37:41
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淘七九懒

铁杆木虫 (著名写手)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-07-26 22:16:47
首先确定,所用的材料没有问题。你说提的基因组?还是扩增基因组上的目的基因?引物设计也很重要,确定引物没有问题!温度可以从40度开始扩增,一般温度越高特异性越高!希望有所帮助!

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7楼2016-07-25 13:05:25
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Chsir

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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退火温度,引物特异性,我觉得应该从这两个方面看看,再做个阴性对照,把模板DNA换成灭菌水
8楼2016-07-25 16:25:36
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23柚子茶23

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 晴空姜 at 2016-07-23 20:37:41
contamination  建议buffer DNTP primer等都换新的 另外有阳性对照 阴性对照和TE吗

mix体系的东西都是固定好了的,没办法换,你说的阳性和阴性对照分别怎么做?

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3楼2016-07-24 16:27:43
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不爱做实验

银虫 (正式写手)

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-07-26 22:16:23
1、检查DNA提取的质量
2、引物是否具有特异性
3、温度条件是否合适:
    一般可将第一个退火温度适当降低,先获得目的片段,再进行后续多次循环
4楼2016-07-24 16:51:10
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安静de执着14

新虫 (著名写手)

dna浓度太大,dna模板减少试试。

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5楼2016-07-24 17:06:56
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houfuyuan

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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跑得程序呢?用的什么酶?扩长片段要用特定的酶。还有延伸时间加长。
玉无瑕,青春无华。
6楼2016-07-24 19:22:59
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hbtmsw

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-07-26 22:17:47
要么是引物加多了 ,要么是模板太多或是杂质太多,前面一大片亮的要么是引物二聚体,要么就是模板中美除去的RNA,改进措施是降低引物浓度和模板添加量,提取的基因组最好是用RNA酶处理一下.
9楼2016-07-26 09:56:47
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阿尔卑斯英

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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对照Marker多大,怎么看都像是提取的RNA还带着基因组污染。
10楼2016-07-26 15:22:13
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