应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR没有条带
192/2返回列表上一页12
查看: 1813  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

flyazheng

铜虫 (小有名气)
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-07-26 22:17:19
扩不出来一般大方向:模板、引物、体系。模板考虑浓度和纯度(和上样量有关)，引物考虑退火和特异性，体系就看说明书怎么要求。看了你的图，觉得应该是引物和模板问题，建议模板测一下浓度纯度，引物的话重新设计吧。如果觉得引物没问题你就加少一点模板，换另一种酶试试。另外，阳性是指一定能扩出来的对照，阴性一般模板是水，但是也不一定，你可以拿别人的dna试着跑一下做对照。总之就是一步步实验排除各种因素吧。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
11楼2016-07-26 19:23:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

23柚子茶23

新虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by flyazheng at 2016-07-26 19:23:11
扩不出来一般大方向:模板、引物、体系。模板考虑浓度和纯度(和上样量有关)，引物考虑退火和特异性，体系就看说明书怎么要求。看了你的图，觉得应该是引物和模板问题，建议模板测一下浓度纯度，引物的话重新设计吧。 ...

谢啦！

发自小木虫Android客户端
回复此楼
12楼2016-07-26 20:41:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

23柚子茶23

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 阿尔卑斯英 at 2016-07-26 15:22:13
对照Marker多大，怎么看都像是提取的RNA还带着基因组污染。

1kb的maker,最大的是15000

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
13楼2016-07-26 20:43:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

23柚子茶23

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by hbtmsw at 2016-07-26 09:56:47
要么是引物加多了 ,要么是模板太多或是杂质太多,前面一大片亮的要么是引物二聚体,要么就是模板中美除去的RNA,改进措施是降低引物浓度和模板添加量,提取的基因组最好是用RNA酶处理一下.

这是提取的基因组电泳图，不是PCR图

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
14楼2016-07-26 20:44:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hbtmsw

木虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 23柚子茶23 at 2016-07-26 20:44:56
这是提取的基因组电泳图，不是PCR图
...

.....基因组,完全没看到,你提的怎么样品? 丝状真菌\酵母\细菌?    基因组提取 就算DNA断裂也会在几十KB的地方有条带,看你的胶marker如果是拉姆大Hind3的话那最后后面浅浅的一条可能是基因组条带,不管怎么样你的提取物RNA\蛋白都出去的不彻底,蛋白去除可用酚\氯仿重复抽提几次或是蛋白酶K处理,RNA加RNA酶处理.
赞一下 回复此楼
15楼2016-07-27 11:35:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

23柚子茶23

新虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by hbtmsw at 2016-07-27 11:35:20
.....基因组,完全没看到,你提的怎么样品? 丝状真菌\酵母\细菌?    基因组提取 就算DNA断裂也会在几十KB的地方有条带,看你的胶marker如果是拉姆大Hind3的话那最后后面浅浅的一条可能是基因组条带,不管怎么样你的提取 ...

是放线菌的，提基因组有没有什么建议

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
16楼2016-07-27 12:52:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hbtmsw

木虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 23柚子茶23 at 2016-07-27 12:52:47
是放线菌的，提基因组有没有什么建议
...

放线菌和丝状真菌一样比较难提,破壁很重要,菌体量要多一些,因为都是菌丝看着很多其实相比细菌而言DNA少的很,溶菌酶处理时间可以长一些,酶处理前也可反复溶冻,有条件也可液氮研磨.后面的就和其他细菌提基因组基本一样了,除蛋白的话传统方法就是酚氯仿多抽提几次,要不就加蛋白酶k处理
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

23柚子茶23
17楼2016-07-27 13:54:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

23柚子茶23

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
17楼: Originally posted by hbtmsw at 2016-07-27 13:54:29
放线菌和丝状真菌一样比较难提,破壁很重要,菌体量要多一些,因为都是菌丝看着很多其实相比细菌而言DNA少的很,溶菌酶处理时间可以长一些,酶处理前也可反复溶冻,有条件也可液氮研磨.后面的就和其他细菌提基因组基本一 ...

谢谢

发自小木虫Android客户端
回复此楼
18楼2016-07-28 14:32:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tjabhm


发自小木虫Android客户端
19楼2016-08-01 09:44:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 23柚子茶23 的主题更新
192/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 08:14 by C79jjtjAKjEn
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-15 08:02 by C79jjtjAKjEn
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 07:58 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-15 07:46 by C79jjtjAKjEn
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-15 07:34 by C79jjtjAKjEn
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 4/200 2026-09-15 07:26 by C79jjtjAKjEn
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +6 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 6/300 2026-09-15 07:14 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-15 07:02 by 5BDX0d0WFp7t
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-15 06:49 by 5BDX0d0WFp7t
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 4/200 2026-09-15 05:50 by 5BDX0d0WFp7t
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 3/150 2026-09-15 05:49 by 5BDX0d0WFp7t
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +6 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 7/350 2026-09-15 05:22 by 5BDX0d0WFp7t
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 8/400 2026-09-15 05:01 by mibUvS8DDCwf
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 23jxep3nCNZb 2026-09-14 3/150 2026-09-15 01:21 by mibUvS8DDCwf
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-14 23:24 by vZfe6xYu34yj
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:45 by vZfe6xYu34yj
[找工作] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:13 by vZfe6xYu34yj
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:25 by vZfe6xYu34yj
[考博] 上海工程技术大学激光智能制造课题组招收博士研究生 +4 两三岁ss 2026-09-14 4/200 2026-09-14 20:29 by 班主任的同桌
[找工作] 浙江师范大学是怎么坑我的 +6 recruit123 2026-09-09 6/300 2026-09-14 12:00 by 萨仁其其格
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭