应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 载体构建
181/2返回列表12下一页
查看: 2029  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

18354255512

新虫 (小有名气)

[求助] 载体构建 已有5人参与

构建载体过程中，将我的目的片段大约1000bp连接到pcambia1302载体上，挑的克隆做菌落pcr带很亮，但测序一直无信号，已经做了一个多月了，重新连接转化了好几次了，都是无信号，是怎么回事啊？求大神指点

@biostar2009 发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2016-07-21 09:36:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

王平阳

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-07-21 12:59:47
不知道你测序是自己做的还是公司做的，测序引物是什么？
测序没有信号一般就两个原因，一是测序引物在质粒上没有匹配序列，即质粒构建错误或者测序引物不对，既然你的菌P没有问题，建议采用你做菌P的引物测序，上下游做一个双向测，如还需要载体上序列，可以采用步移法测序；另一个可能的原因就是质粒污染，测序峰非常混乱，从而表现出无信号，你既然做了很多次，这个应该可以排除。祝你好运！
赞一下(1人) 回复此楼
没有做不到，只有想不到！
2楼2016-07-21 09:56:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

781055707

木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 18354255512 at 2016-07-21 11:19:06
双酶切没有做，不过假阳性率会那么高吗，每次菌pcr的带都挺亮的呀
...

那你要双酶切得呀，PCR对于有些片段是很容易产生气溶胶污染的。
赞一下(1人) 回复此楼
采菊东篱下，悠然见南山。
6楼2016-07-21 16:48:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-07-21 12:59:54
你双酶切过吗，PCR假阳性也说不定的。
赞一下 回复此楼
采菊东篱下，悠然见南山。
3楼2016-07-21 11:01:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18354255512

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 王平阳 at 2016-07-21 09:56:16
不知道你测序是自己做的还是公司做的，测序引物是什么？
测序没有信号一般就两个原因，一是测序引物在质粒上没有匹配序列，即质粒构建错误或者测序引物不对，既然你的菌P没有问题，建议采用你做菌P的引物测序，上下 ...

非常感谢你的提议，我是送公司做的，你所说的质粒污染是我测序送的质粒吗，还是构建过程中目的片段和载体的污染啊，不过我之前大多送的是菌液，就送过两次质粒，都测出来没信号

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2016-07-21 11:17:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18354255512

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 781055707 at 2016-07-21 11:01:12
你双酶切过吗，PCR假阳性也说不定的。

双酶切没有做，不过假阳性率会那么高吗，每次菌pcr的带都挺亮的呀

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2016-07-21 11:19:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你是怎么连的呀，双酶切、单酶切还是怎样，会不会出现双向的连接产物啊，这样的话可能没有信号
赞一下 回复此楼
···
7楼2016-07-22 11:01:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

feierorange

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的质粒没有酶切鉴定一下吗？菌落PCR的结果不一定可信
赞一下 回复此楼
8楼2016-07-22 13:02:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18354255512

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 小冀- at 2016-07-22 11:01:46
你是怎么连的呀，双酶切、单酶切还是怎样，会不会出现双向的连接产物啊，这样的话可能没有信号

双酶切的

发自小木虫Android客户端
回复此楼
9楼2016-07-22 19:48:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

风萧萧1028

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
肯定要提取质粒做双酶切验证啊！
赞一下 回复此楼
10楼2016-07-22 21:30:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 18354255512 的主题更新
181/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 今年也是没消息就是没中么 +5 vito刘 2026-06-13 9/450 2026-06-14 11:31 by newfuzzy1
[考研] *O_o^ +3 jk31rb6vyz 2026-06-12 3/150 2026-06-14 09:08 by 8bmv3h4hvh
[硕博家园] T^T +7 m584r2z4j3 2026-06-11 8/400 2026-06-14 08:34 by 8bmv3h4hvh
[公派出国] T^T +6 q1zg6x4lf3 2026-06-12 6/300 2026-06-14 08:28 by 8bmv3h4hvh
[考博] T^T +4 q1zg6x4lf3 2026-06-12 4/200 2026-06-14 08:26 by 8bmv3h4hvh
[考研] O(∩_∩)O +4 q1zg6x4lf3 2026-06-12 5/250 2026-06-14 08:23 by 8bmv3h4hvh
[硕博家园] O(∩_∩)O +6 jk31rb6vyz 2026-06-12 8/400 2026-06-14 08:10 by 8bmv3h4hvh
[基金申请] 函评 +3 布布和一二 2026-06-13 3/150 2026-06-13 23:35 by 芋圆香飘飘
[找工作] 售SCI文章，我:8.O.5.51O.5.4,科目齐全,可十急 +3 q1zg6x4lf3 2026-06-12 3/150 2026-06-13 19:07 by 1js5n6upxm
[考研] T^T +6 m584r2z4j3 2026-06-11 6/300 2026-06-13 18:29 by lkmi35jdzt
[文学芳草园] 咸菜 +3 myrtle 2026-06-10 3/150 2026-06-13 18:29 by ahsoarli
[考研] o>_<o +5 m584r2z4j3 2026-06-11 5/250 2026-06-13 18:22 by lkmi35jdzt
[考博] T^T +4 jk31rb6vyz 2026-06-12 4/200 2026-06-13 12:09 by 80j16ujcu8
[找工作] 售SCI文章，我:8.O.5.51O.5.4,科目齐全,可十急 +4 q1zg6x4lf3 2026-06-12 4/200 2026-06-13 08:53 by t4hz8376wy
[基金申请] 面上项目没有好文章就没希望了吗？ +19 1234567wang 2026-06-07 21/1050 2026-06-12 21:24 by littlezl
[考博] [急招]吉林大学招收26年9月入学考核制博士生1名，截止今晚24点前 +3 hehejin 2026-06-10 4/200 2026-06-12 18:24 by 冻雨天
[基金申请] 前几天时间戳更新了 +8 vito刘 2026-06-11 13/650 2026-06-12 14:17 by BlakeReary
[教师之家] AASSDDFF +3 m584r2z4j3 2026-06-11 3/150 2026-06-12 11:28 by zs48m4lz8g
[考博] 还有课题组有博士名额吗 +5 冻雨天 2026-06-07 6/300 2026-06-08 20:59 by RCS_tyro
[考博] 博士申请 +3 张城斐 2026-06-07 3/150 2026-06-08 09:15 by A大朋同学
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭