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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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18354255512

新虫 (小有名气)

[求助] 载体构建 已有5人参与

构建载体过程中,将我的目的片段大约1000bp连接到pcambia1302载体上,挑的克隆做菌落pcr带很亮,但测序一直无信号,已经做了一个多月了,重新连接转化了好几次了,都是无信号,是怎么回事啊?求大神指点

@biostar2009 发自小木虫Android客户端
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18354255512

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 王平阳 at 2016-07-21 09:56:16
不知道你测序是自己做的还是公司做的,测序引物是什么?
测序没有信号一般就两个原因,一是测序引物在质粒上没有匹配序列,即质粒构建错误或者测序引物不对,既然你的菌P没有问题,建议采用你做菌P的引物测序,上下 ...

非常感谢你的提议,我是送公司做的,你所说的质粒污染是我测序送的质粒吗,还是构建过程中目的片段和载体的污染啊,不过我之前大多送的是菌液,就送过两次质粒,都测出来没信号

发自小木虫Android客户端
4楼2016-07-21 11:17:24
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王平阳

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-07-21 12:59:47
不知道你测序是自己做的还是公司做的,测序引物是什么?
测序没有信号一般就两个原因,一是测序引物在质粒上没有匹配序列,即质粒构建错误或者测序引物不对,既然你的菌P没有问题,建议采用你做菌P的引物测序,上下游做一个双向测,如还需要载体上序列,可以采用步移法测序;另一个可能的原因就是质粒污染,测序峰非常混乱,从而表现出无信号,你既然做了很多次,这个应该可以排除。祝你好运!
没有做不到,只有想不到!
2楼2016-07-21 09:56:16
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-07-21 12:59:54
你双酶切过吗,PCR假阳性也说不定的。
采菊东篱下,悠然见南山。
3楼2016-07-21 11:01:12
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18354255512

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 781055707 at 2016-07-21 11:01:12
你双酶切过吗,PCR假阳性也说不定的。

双酶切没有做,不过假阳性率会那么高吗,每次菌pcr的带都挺亮的呀

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5楼2016-07-21 11:19:06
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