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lpz598417258

铁虫 (初入文坛)

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虫号: 2498223
注册: 2013-06-06
性别: GG
专业: 食品加工技术

[求助] 多糖分离纯化求助，DEAE-52已有2人参与

本人做多糖纯化，梯度洗脱，跑了四次，都不理想。求哪位分离纯化帮忙，求顺利毕业！！
现在把就具体的参数说明下：填料DEAE-52，柱子为2.6*40，0.1,0.2,0.3,0.4,0.5 NaCl Tris-HCl溶液洗脱，多糖分子量是10万 Da左右。

讲实话，这些图我自己都看不下去了。实验的我做的真是没脾气，想请教哪位大神可以帮我分析下这些洗脱图。给点意见，到底是我参数没有设定好，还是柱子或者填料选择有问题？？

第一次，上样量100mg 流速：1ml/ml 每管1min 每个梯度跑80根管，但隔空测定，每个梯度40根管。

第二次，参数同第一次。第一次单是用缓冲液就直接全冲出来了，怀疑是柱子没填实，此次将柱子附加了填料，并压实。

第三次，参数同第一次。

第四次，总结前三次，怀疑是流速太大，低极性浓度时就全洗出了。这次将填料用酸碱和水处理，再生了下。参数调整为上样量为25mg, 0.5 ml/min 每个梯度收集20根管，没根管10min。依次测定

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1楼2016-07-19 17:02:02

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lpz598417258

铁虫 (初入文坛)

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引用回帖:

7楼: Originally posted by 玉面女侠小菲 at 2016-07-26 10:55:50
填料里的气泡是看不到的，你用旋蒸旋一下就看到气泡了，直到旋蒸的时候不再有气泡为止才可以装柱。这就是所谓的脱气。...

又跑了一次，结果还是不好。我重装柱子时，确实没有脱气。柱子装填中进行了引流，没有断层，也进行了平衡。那我试着脱气完装下柱子，再做一次吧。
还有些问题想请教：1，您说的在柱子上加一层定性滤纸，指的是在柱子高度不再变化，在其表面上加吗？？这样滤纸一直泡在液体里面，不就会烂掉掺在了填料中了吗？？
2，脱气操作能不能用超声波？？您是用旋蒸低压脱气，超声也可以除气泡，我觉得超声省时省事一些。