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lpz598417258铁虫 (初入文坛)
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[求助]
多糖分离纯化求助，DEAE-52 已有2人参与
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本人做多糖纯化，梯度洗脱，跑了四次，都不理想。求哪位分离纯化帮忙，求顺利毕业！！ 现在把就具体的参数说明下：填料DEAE-52，柱子为2.6*40，0.1,0.2,0.3,0.4,0.5 NaCl Tris-HCl溶液洗脱，多糖分子量是10万 Da左右。 讲实话，这些图我自己都看不下去了。实验的我做的真是没脾气，想请教哪位大神可以帮我分析下这些洗脱图。给点意见，到底是我参数没有设定好，还是柱子或者填料选择有问题？？  第一次，上样量100mg 流速：1ml/ml 每管1min 每个梯度跑80根管，但隔空测定，每个梯度40根管。  第二次，参数同第一次。第一次单是用缓冲液就直接全冲出来了，怀疑是柱子没填实，此次将柱子附加了填料，并压实。  第三次，参数同第一次。  第四次，总结前三次，怀疑是流速太大，低极性浓度时就全洗出了。这次将填料用酸碱和水处理，再生了下。参数调整为上样量为25mg, 0.5 ml/min 每个梯度收集20根管，没根管10min。依次测定 |
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lpz598417258
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4楼2016-07-20 18:08:41
lpz598417258
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【答案】应助回帖
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lpz598417258: 金币+5, ★★★很有帮助 2016-07-25 23:12:30
lpz598417258: 金币+5, ★★★很有帮助 2016-07-25 23:12:30
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我觉得可能是填料没有处理好。第一，再生后的填料要进行脱气，如果脱气不好会影响你洗脱的结果；第二，脱气后的填料在装柱的时候要进行引流，而且不能出现断层，在装柱过程中，要在柱子底部留1-2cm缓冲液，装柱过程中恒流泵要开着；第三，装柱后要进行平衡，用缓冲液平衡柱子，直到柱子的高度和液位的高度不再变化才可以上样，不能压柱子，最好在柱子上层加一张定性滤纸，防止上样过程中，破坏柱子表层的平面。第四，平衡柱子的流速一般要高于洗脱时的流速。 之前做分离的一些心得，希望对你有用！ |
5楼2016-07-25 22:14:55
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