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lpz598417258

铁虫 (初入文坛)

[求助] 多糖分离纯化求助,DEAE-52已有2人参与

本人做多糖纯化,梯度洗脱,跑了四次,都不理想。求哪位分离纯化帮忙,求顺利毕业!!
现在把就具体的参数说明下:填料DEAE-52,柱子为2.6*40,0.1,0.2,0.3,0.4,0.5 NaCl Tris-HCl溶液洗脱,多糖分子量是10万 Da左右。

讲实话,这些图我自己都看不下去了。实验的我做的真是没脾气,想请教哪位大神可以帮我分析下这些洗脱图。给点意见,到底是我参数没有设定好,还是柱子或者填料选择有问题??

多糖分离纯化求助,DEAE-52
第一次,上样量100mg 流速:1ml/ml 每管1min 每个梯度跑80根管,但隔空测定,每个梯度40根管。


多糖分离纯化求助,DEAE-52-1
第二次,参数同第一次。第一次单是用缓冲液就直接全冲出来了,怀疑是柱子没填实,此次将柱子附加了填料,并压实。


多糖分离纯化求助,DEAE-52-2
第三次,参数同第一次。


多糖分离纯化求助,DEAE-52-3
第四次,总结前三次,怀疑是流速太大,低极性浓度时就全洗出了。这次将填料用酸碱和水处理,再生了下。参数调整为上样量为25mg, 0.5 ml/min 每个梯度收集20根管,没根管10min。依次测定
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玉面女侠小菲

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
lpz598417258: 金币+5, ★★★很有帮助 2016-07-25 23:12:30
我觉得可能是填料没有处理好。第一,再生后的填料要进行脱气,如果脱气不好会影响你洗脱的结果;第二,脱气后的填料在装柱的时候要进行引流,而且不能出现断层,在装柱过程中,要在柱子底部留1-2cm缓冲液,装柱过程中恒流泵要开着;第三,装柱后要进行平衡,用缓冲液平衡柱子,直到柱子的高度和液位的高度不再变化才可以上样,不能压柱子,最好在柱子上层加一张定性滤纸,防止上样过程中,破坏柱子表层的平面。第四,平衡柱子的流速一般要高于洗脱时的流速。
之前做分离的一些心得,希望对你有用!
奋斗不息
5楼2016-07-25 22:14:55
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lpz598417258

铁虫 (初入文坛)

我们实验室,就我自己做多糖,所以基本都是自己在折腾这些东西。孤立求援啊!!
2楼2016-07-19 17:04:04
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lpz598417258: 金币+2, 有帮助 2016-07-20 18:07:17
可以尝试羟丙基葡聚糖凝胶LH-20的填料,或者DEAE高流速琼脂糖凝胶,或者Q高流速琼脂糖凝胶。
3楼2016-07-20 17:43:41
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lpz598417258

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by hc-material at 2016-07-20 17:43:41
可以尝试羟丙基葡聚糖凝胶LH-20的填料,或者DEAE高流速琼脂糖凝胶,或者Q高流速琼脂糖凝胶。

我想再试一下,DEAE-52这个填料蛮贵的。我想多尝试下,如果真不行,再考虑换填料。
4楼2016-07-20 18:08:41
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